Examinando por Autor "Silva Moreno, Evelyn"
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Ítem Caracterización de la actividad antifúngica de poligodial sobre el hongo fitopatógeno Botrytis Cinerea(Universidad Andrés Bello, 2018) Robles Kelly, Christian Gonzalo; Silva Moreno, Evelyn; Carrasco, Héctor; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaEl hongo Botrytis cinerea, causante de la pudrición gris (PG), es un patógeno capaz de afectar a una gran variedad de cultivos agrícolas. En Chile, este hongo afecta a diversas especies frutícolas entre las que se encuentra la uva de mesa, uno de los principales productos de exportación de nuestro país. Tradicionalmente, el control de la PG se realiza mediante el uso de fungicidas químicos como benzimidazoles, fenilcarbamatos, dicarboximidas y anilinopirimidinas. Sin embargo, el uso intensivo y prolongado de estos fungicidas ha llevado a la aparición de cepas del hongo que muestran diversos niveles de resistencia. En Chile la aparición de aislados de B. cinerea resistentes a estos fungicidas ha ido aumentando progresivamente, alcanzando un 60% el año 2011. Estos antecedentes han impulsado la búsqueda de nuevos agentes fungicidas y/o formulaciones, eficientes y amigables con el medio ambiente, para el control de B. cinerea. Es por ello por lo que, como alternativa se plantea, la producción de una nueva generación de antifúngicos en base a compuestos naturales, extraídos de plantas. El propósito de esta investigación fue evaluar la actividad antifúngica del compuesto natural, poligodial, extraído desde el árbol del canelo, sobre el hongo fitopátogeno B.cinerea. Para ello, se realizaron estudios sobre el efecto de inhibición del crecimiento micelial y germinación de las conidias. Además de estudiar el mecanismo de acción por el cual actúa poligodial, a través de ensayos de estabilización de membrana, acumulación de especies reactivas de oxígeno y análisis de genes relacionados con daño celular. Se logró establecer que poligodial presenta una actividad biológica sobre la germinación de las conidias, provocando una ralentización del crecimiento micelial y el mecanismo de acción se asocia a la desestabilización de membrana.Ítem Caracterización de una celobiohidrolasa en Botrytis cinerea(Universidad Andrés Bello, 2016) Hormazabal Castillo, Juan Patricio; Silva Moreno, Evelyn; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaEn los últimos años, la industria hortofiutícola chilena ha tenido un aumento significativo en los volúmenes de producción y exportación, presentándose como un mercado sumamente rentable a nivel internacional. El incremento en los niveles de exportación radica en la mejora de la calidad en general de los productos. Existen diversos patógenos fúngicos, bacterianos y virales que constituyen una amenaza para la productividad y calidad de la fruta. Entre los patógenos más agresivos se encuentra el hongo Botrytis cinerea, que causa la enfermedad llamada "pudrición gris", la cual está situada como uno de los mayores problemas fitosanitarios en los cultivos de nuestro país. Tradicionalmente, el control se ha basado en el uso de fungicidas de origen químico. Sin embargo, se ha descrito que éstos presentan impactos negativos para el medioambiente y su uso reiterado da origen a la aparición de cepas resistentes. A pesar de que las etapas del ciclo infectivo están bien identificadas, se desconocen los mecanismos moleculares blancos y/o regulatorios que comandan la etapa de germinación. Es por esto, que la aproximación de identificar y caracterizar aquellos genes involucrados en virulencia, específicamente en las etapas tempranos de la infección, son claves para impedir el éxito de la infección. En estudios previos realizados en nuestro laboratorio, mediante análisis de expresión génica en etapas tempranas de infección, entre los genes sobre-expresados en germinación se identificó a una putativa celobiohidrolasa denominada Bcch1, enzima perteneciente al grupo de CAZymes, lo cual sugiere un posible rol importante en la salida de dormancia de la espora durante la germinación. En base a lo anterior, se hace relevante estudiar la función de este gen en la virulencia y/o patogenicidad de Botrytis. Por lo tanto, en este estudio de identificó, aisló, caracterizó y se realizaron estudios funcionales del gen Bcchl, que codifica para una celobiohidrolasa.Ítem Efecto de extracto de cáscara de quinua sobre el crecimiento y germinación de Botrytis cinerea y Penicillium italicum : evaluación del posible mecanismo de acción(Universidad Andrés Bello, 2019) Farías González, María José; Palma G., Francisco; Silva Moreno, Evelyn; Krauskopf, Erwin; Facultad de Ciencias BiológicasLos cítricos son los cultivos frutales más importantes a nivel mundial y constituyen una excelente fuente de nutrientes y antioxidantes. La contaminación por hongos es un problema asociado al cultivo de cítricos, lo que genera grandes pérdidas económicas. En los cítricos, los hongos que tienen mayor incidencia son Penicillium italicum (causante del moho azul) y Botrytis cinerea (causante del moho gris). Ambos tienen la capacidad de ingresar al fruto mediante heridas en la superficie de la fruta o por secreción activa de enzimas. Comúnmente, se utilizan fungicidas químicos sintéticos para controlar este tipo de contaminación, lo que ha generado en la última década la aparición de cepas resistentes. El estudio de metabolitos secundarios (MS), obtenidos desde plantas, se vislumbra como una estrategia interesante de explorar para la generación de fungicidas naturales que suplan algunas de las desventajas de los fungicidas sintéticos, tales como la generación de resistencia en cepas de B. cinerea y P. italicum y presencia de residuos de estos en frutas en destino. Las saponinas corresponden a metabolitos secundarios de implicadas en la resistencia al ataque de patógenos, siendo abundantes en la cascarilla de quinua chilena (Chenopodium quinoa). En esta tesis se realizó la extracción de saponinas desde la cascarilla de quinua contemplando 4 etapas principales: (I) maceración, (II) precipitación de proteínas, (III) hidrólisis alcalina y (IV) ajuste de pH. Además, se evaluó el efecto de la temperatura (24 °C y 60 °C) en la etapa I, y el efecto de ausencia o presencia de la etapa III. El extracto 1 fue sometido a calentamiento (60°C) y a la etapa III, el extracto 2 fue sometido a calentamiento (60°C) en la etapa I, y el extracto 3 se mantuvo a 24°C. Finalmente, se evaluó la actividad antifúngica de tres extractos de quinua, enriquecidos en saponinas, sobre el crecimiento y germinación de Penicillium italicum y Botrytis cinerea. Además se estudió el mecanismo de acción que ejercen estos extractos contra el hongo. Los resultados muestran que el extracto 1 presenta una mayor cantidad de saponinas (48,5% peso seco) en comparación a los extractos 2 y 3. También, posee un efecto fungistático relevante en los hongos estudiados, disminuyendo el crecimiento micelial de ambos hongos. Además, los extractos 1, 2 y 3 producen una disminución en el porcentaje de germinación de B. cinerea y P. italicum, pero el efecto de éste último es más notorio. Se encontró que el extracto 1 aumenta la producción de ROS en P. italicum y causa daño en la membrana plasmática de ambos hongos. Los resultados anteriores sugieren que el extracto 1 podría ser utilizado en el desarrollo de algún fungistático.Ítem Identificación y análisis funcional de genes de etapas tempranas del ciclo biológico de botrytis cinerea(Universidad Andrés Bello, 2009) Silva Moreno, Evelyn; Valenzuela, PabloEl hongo Botrytis cinerea es uno de los principales problemas fitosanitarios de la industria hortofrutícola en Chile, causando importantes pérdidas económicas antes, durante y después de la cosecha en cultivos como vides, tomates, frutillas, arándanos, duraznos, etc. La infección comienza cuando las esporas se adhieren a la superficie de la planta donde germinan y forman la hifa de infección. Esta estructura es capaz de atravesar la cutícula e invadir al hospedero por degradación química de la pared celular mediante la producción de enzimas hidrolíticas que permiten la invasión y posterior colonización del tejido. En este trabajo se han caracterizado diferentes asilados de B. cinerea disponibles en el laboratorio, lo que permitió identificar aislados con diferentes grados de virulencia. Posteriormente, mediante la generación de una genoteca de ADNc y el uso de herramientas bioinformáticas, se identificó genes involucrados en etapas tempranas de la infección e importantes en la patogenicidad de B. cinerea. Adicionalmente, el diseño y análisis preliminar de expresión génica, mediante microarreglos, permitió la identificación de 171 genes específicos de la espora, 92 genes específicos de la germinación y 544 relacionados con el crecimiento de la hifa de B. cinerea. De un total de 180 genes ortólogos identificados, el 40% de ellos están involucrados en etapas iniciales como adhesión, conidiogénesis, germinación y crecimiento de la hifa. Algunos de estos genes se aislaron, clonaron y secuenciaron y se analizó su expresión. Entre estos, el gen hex-1 que codifica para la proteína principal del cuerpo de Woronin, presentó un patrón de expresión diferencial al comparar dos aislados con diferente velocidad de crecimiento. El análisis funcional de hex-1 permitió revelar su importancia como gen patogénico y sugirió una participación, no sólo en el crecimiento vegetativo sino también en la germinación y en la capacidad de establecer la infección por B. cinerea. Otro gen estudiado fue cox-5, el cual codifica para una subunidad de la citocromo C oxidasa. Análisis funcionales de cox-5 permitió identificar un fenotipo letal producto de la inactivación del gen. En virtud de lo anterior, la identificación y caracterización de hex-1 y cox-5 proporcionan dos nuevos blancos para desarrollar estrategias de defensa en la planta que apunte a inactivar la capacidad del hongo de crecer sobre superficies vegetales. En resumen, este trabajo representa un aporte importante al conocimiento de la maquinaría génica que dispone este patógeno para invadir su hospedero y define un importante inventario de genes de B. cinerea para futuros estudios acerca de la interacción planta-patógeno.