Examinando por Autor "Zundert, Brigitte van"
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Ítem Caracterización de los niveles de PSD95 y marcas epigenéticas en el hipocampo del modelo murino de Huntington R6/2(Universidad Andrés Bello, 2022) Leiva Reyes, Kevin Bryan; Zundert, Brigitte van; Facultad de Ciencias de la VidaPSD95 es una de las proteínas más abundantes en la densidad postsináptica de las sinapsis glutamatérgicas maduras, donde cumple funciones de reclutamiento y andamiaje de receptores sinápticos. PSD95 también actúa como una señal de detención para la dendritogenesis, para luego desempeñar funciones críticas en la estabilidad estructural del árbol dendrítico. La disminución de los niveles de PSD95 está asociado a distintas enfermedades neurodegenerativas, tal como la enfermedad de Huntington. La enfermedad de Huntington se caracteriza por una abundante muerte neuronal mediada por excitotoxicidad, lo que eventualmente produce la muerte de los pacientes, y al día de hoy no existe una cura para esta enfermedad. Además, presenta características clínicas tripartitas que afectan las funciones motoras, cognitivas y conductuales. El modelo murino de Huntington R6/2 se caracteriza por presentar una progresión rápida de los síntomas, como los déficits cognitivos que se manifiestan tempranamente. También se ha observado una disminución en los niveles de PSD95 sináptico en parte de la corteza, y una disminución de PSD95 total en el cuerpo estriado de este modelo. Sin embargo, en animales R6/2 no se han estudiado los niveles de Dlg4/PSD95 en el hipocampo, el cual es un sector donde ocurren procesos cognitivos como el aprendizaje y la memoria. Por otra parte, también se ha identificado que en la enfermedad de Huntington se produce una desregulación del paisaje epigenético, como la disminución del nivel de acetilación de histonas. Previamente, nuestro laboratorio ha identificado acetilaciones de histonas en el promotor de Dlg4/PSD95 que promueven su expresión, como la H3K9ac y H3ac total. En base a lo anterior, la hipótesis de este proyecto postula que los niveles de Dlg4/PSD95, y sus marcas epigenéticas activadoras H3K9ac y H3ac total, disminuyen en el hipocampo del modelo R6/2. El primer objetivo fue caracterizar la expresión de los niveles de ARNm y proteínas de Dlg4/PSD95 en hipocampo, obtenidos desde animales R6/2 sintomáticos y control en el día postnatal 100, mediante RT-qPCR y western blot, respectivamente. El segundo objetivo se centró en caracterizar los niveles de proteínas, mediante western blot, de las marcas epigenéticas H3K9ac y H3ac total. Los resultados indicaron que los niveles de ARN y proteínas de Dlg4/PSD95 disminuyeron, pero no significativamente (n=3 muestras por grupo), aunque los resultados son indicativos de una posible desregulación de Dlg4/PSD95 en el hipocampo de ratones R6/2. Se requiere un análisis más profundo con más muestras para llegar a una conclusiónÍtem Edición epigenética del promotor de PSD95 como estrategia para el tratamiento de los síntomas de la Enfermedad de Huntington(Universidad Andrés Bello, 2023) Fernández Villalobos, Germán Leonardo; Zundert, Brigitte vanLa enfermedad de Huntington (HD) es una patología hereditaria, incurable y que se produce por un aumento de los repetidos CAG en el exón 1 del gen de la proteína Huntingtina. Esta patología se asocia con una serie de síntomas motores, que implican un aumento en los movimientos involuntarios junto con otros síntomas neuropatológicos. La fisiopatología de esta enfermedad se asocia con una serie de eventos que ocurren de forma secuencial y cuyo origen se ha trazado hasta los circuitos cortico-estriatales, desde donde se expande a otras regiones del cerebro, particularmente hipocampo. A nivel celular, se han observado una serie de cambios en la estructura de las sinapsis, los que tiene importantes consecuencias para el establecimiento, mantención de los circuitos neuronales y para la sobrevida de la neurona. Una de las proteínas asociadas a estas fallas es la proteína de la densidad postsináptica 95 (PSD95) la que es abundante en las densidades postinápticas, cumple funciones de andamiaje y que presenta una importante disminución en pacientes de HD, asociandose con problemas cognitivos, motores y conductuales. Nuestro laboratorio ha desarrollado una herramienta de edición epigenética conocida como PSD95-6ZF-VP64, que se une a la región promotora del gen de PSD95, promoviendo su expresión, restableciendo la transmisión sináptica y la densidad de espinas dendríticas en neuronas hipocampales de un modelo de la enfermedad de Alzheimer. En el presente trabajo se muestra que el animal R6/2, que presenta los principales síntomas de HD en una ventana corta de tiempo, presenta niveles bajos de mRNA y proteína de PSD95, los que pueden ser revertidos al tratar los animales con PSD95-6ZF-VP64 luego de nacer. Este tratamiento además retrasa los síntomas tempranos asociados a memoria y aprendizaje, característicos de la enfermedad, pero no revierte la aparición de los síntomas tardíos. Esta evidencia sugiere que PSD95 estaría jugando un rol importante en las primeras fases de la patología, una de las fases más largas y complejas para los pacientes y sus familias, lo que podría constituir un atrayente blanco terapéutico para el tratamiento de la fase prodrómica de la enfermedad.Ítem Efectos en la memoria a largo plazo de la modulación transcripcional de PSD-95 mediante mecanismos epigenéticos en un modelo de condicionamiento al miedo(Universidad Andrés Bello, 2016) Salas Vargas, Claudio Ignacio José; Zundert, Brigitte van; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaEl aprendizaje y memoria son procesos mentales fundamentales, sin dichos eventos, no seriamos capaces de generar más que reflejos y comportamientos estereotipados. La memoria es un cambio conductual causado por una experiencia y el aprendizaje es el proceso por el cual se adquiere dicha memoria. El aprendizaje y la memoria requieren de la activación de receptores post-sinápticos, entre los cuales se encuentran los receptores de glutamato N-metil-D-aspartato (R-NMDA). Los R-NMDA, una vez anclados por la proteína de andamiaje PSD-95, son capaces de permitir la entrada de calcio al interior de la célula, lo que genera la activación de cascadas de señalización que controlan la expresión de genes y consecuente síntesis de proteínas. Fenómeno que genera alteraciones altamente dinámicas en la arquitectura sináptica del cerebro, especialmente en el hipocampo. Dichas alteraciones se manifiestan en respuesta a los patrones de actividad que recibe frente a un determinado estímulo. El conjunto de modificaciones en la arquitectura dendrítica le permiten tener la habilidad de reorganizar circuitos neuronales ante los estímulos recibidos por el entorno, proceso que se conoce como plasticidad neuronal. Evento clave en la formación de la memoria, para el eficiente anclaje a la membrana post-sináptica de los R-NMDA, es requerida la participación PSD-95. Proteína que ha sido reportada como una señal de alto para la arborización dendrítica, lo que deja al sistema con una reducida capacidad de plasticidad neuronal. Adicionalmente PSD-95 ha mostrado tener una función importante en el proceso del aprendizaje y memoria. Los mecanismos que regulan la expresión de PSD-95 en procesos relativos a la memoria no han sido completamente dilucidados. Con motivo de manipular la expresión de PSD-95, utilizaremos factores de transcripción previamente diseñados, de tipo Zinc Finger Proteins (ZFPs). Capaces de unirse específicamente al promotor de PSD-95. Estos ZFP estarán fusionados a un dominio efector (ED) que reprime (SUVDEL) o activa (VP64) la expresión de PSD-95. La expresión de estas ZFPs gatillan cambios mediante mecanismos epigenético en las marcas de histonas, además un control bidireccional de la expresión de PSD-95. El objetivo de este estudio es evaluar el rol de PSD-95 en la formación de memoria a largo plazo (MLP). Resultados nuestros obtenidos in vitro muestran un claro efecto de las ZFPs sobre la expresión de PSD-95 en cultivos celulares hipocampales, lo que nos 2 lleva a sugerir que los ZFPs podrían modular la formación de MLP. Estudios realizados utilizando el paradigma de condicionamiento al miedo muestran que la expresión de PSD-95 se ve aumentada en células hipocampales 24 horas después del entrenamiento. En el presente estudio se quiso evaluar los efectos de las distintas ZFPs en la formación de MLP dependiente del hipocampo. Para el desarrollo de esta tesis será utilizado el modelo de condicionamiento al miedo contextual junto con herramientas de biología celular y molecular como western blot y qRT-PCR. En conjunto estos datos nos permitirán entender el rol de PSD-95 en la formación de MLP y los alcances que puede tener el control epigenetico en la formación de la MLP.Ítem Estudio de la contribución de la exposición a polución ambiental del aire urbano de Santiago en la inducción del fenotipo clínico de la demencia frontotemporal en el modelo Murino C9ORF72(Universidad Andrés Bello, 2021) Peña Baeza, Nicolás Adolfo Bernardo; Zundert, Brigitte van; Varela-Nallar, Lorena; Facultad de Ciencias de la VidaLa polución ambiental del aire es una mezcla compleja de gases y nanopartículas (NPs) que se encuentran dispersas ampliamente en el ambiente y que pueden tener efectos tóxicos en la salud humana. Las NPs ingresan al organismo, difundiendo hacia diferentes tejidos incluyendo el sistema nervioso central. En la actualidad este estresor ambiental es una problemática mundial y el área metropolitana de Santiago (AMS) de Chile no es la excepción. La exposición crónica a PM2,5 y NPs de la polución ambiental urbana ha documentado tener efectos negativos para quienes padecen de la enfermedad de Alzheimer (EA) y si además hay presencia de un factor de riesgo genético, se acelera la aparición de la enfermedad. La demencia frontotemporal (DFT) es un espectro neurodegenerativo de múltiples fenotipos clínicos y la mutante C9ORF72 es factor de riesgo genético. A diferencia de la EA, no existe evidencia que relacione la DFT y la polución ambiental del aire. Es por eso que nos preguntamos ¿es posible que las NPs provenientes de la polución ambiental del aire contribuyan al desarrollo del deterioro cognitivo y neuroinflamación asociados a la patogénesis de DFT, tal como sucede en la EA? Para resolver esta pregunta se planteó que “la exposición de un modelo murino de DFT a las NPs provenientes de la polución ambiental del aire del área metropolitana de Santiago de Chile provoca trastornos cognitivos, motores y psicológicos e induce inflamación mediada por glías activadas”. Para poner a prueba nuestra hipótesis utilizamos el modelo murino transgénico C9ORF72, caracterizado por no presentar deficiencia cognitiva (test de NOR) en su edad adulta ni activación glial. Los animales fueron expuestos a la polución ambiental urbana del AMS, donde se evaluó mediante una batería de pruebas conductuales, si dicho estresor ambiental, indujo alguno de los trastornos planteados y además mediante inmunofluorescencia, si indujo la presencia de marcadores de activación glial. La exposición a polución ambiental urbana resulto en: declive cognitivo, trastornos psicológicos, pero no problemas motores, en conjunto con astrogliosis hipocampal en CA1. Estos datos sugieren que las NPs de la polución ambiental del aire podrían contribuir al desarrollo de la patogénesis de DFT en el modelo C9ORF72.Ítem Estudio de la función de PSD-95 en el desarrollo de nuevas neuronas generadas en el hipocampo de cerebro de ratón adulto(Universidad Andrés Bello, 2017) Jorquera Alvarez, Patricia Valentina; Varela-Nallar, Lorena; Zundert, Brigitte van; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaEl hipocampo es una estructura cerebral que sufre continuos cambios celulares y moleculares en respuesta a los estímulos, lo que se conoce como plasticidad. Además, en esta región continuamente se generan nuevas neuronas, procedo denominado neurogénesis, lo que incrementa aún más la plasticidad del hipocampo. La neurogénesis en el adulto ocurre a partir de células madres neurales localizadas en la zona subgranular (SGZ) del giro dentado del hipocampo. Las nuevas neuronas generadas en el hipocampo adulto se integran sinápticamente en el circuito hipocampal y son importantes para procesos de aprendizaje y memoria. La sinapsis excitatoria glutamatérgica se caracteriza por ser una sinapsis asimétrica. La membrana de la espina dendrítica post-sináptica tienen una región electrondensa denominada densidad post-sináptica (PSD), que consiste en un complejo multiprotéico que incluye los receptores AMPA y NMDA, además de moléculas de andamiaje como PSD-95, fundamental para la interacción entre los receptores y las moléculas de neurotransmisión. En neuronas hipocampales, PSD-95 es importante para el desarrollo del árbol dendrítico, formación de espinas dendríticas, maduración y desarrollo de las sinapsis glutamatérgica. En base a estos antecedentes, en la presente tesis se propuso como hipótesis que “PSD-95 regula el desarrollo del árbol dendrítico y de las espinas dendríticas en las nuevas neuronas generadas en el hipocampo de ratón adulto”. Con el fin de sustentar esta hipótesis se planteó como objetivo general “Determinar in vivo el papel de PSD-95 en el desarrollo del árbol dendrítico y de las espinas dendríticas en las nuevas neuronas generadas en el giro dentado del hipocampo de ratón adulto”. Para llevar a cabo los objetivos planteados se generó un retrovirus que expresa un shRNA contra PSD-95 y se analizó su efecto in vivo mediante la inyección del retrovirus en el hipocampo mediante cirugía estereotáxica. Se analizaron las nuevas neuronas a las 2, 4 y 6 semanas post-inyección. Se determinó que el silenciamiento no afectó significativamente la arbolización dendrítica, pero si se observó que las nuevas neuronas deficientes en PSD-95 presentaban dendritas más delgadas y con menor volumen de espinas dendríticas. Los resultados obtenidos indican que la deficiencia de PSD-95 no afecta la generación de nuevas neuronas en el hipocampo adulto, pero si la formación de espinas dendríticas, evento fundamental en la integración sináptica de las nuevas neuronas.Ítem Evaluación de la administración de la poliamina espermidina en la supervivencia y retraso de la disfunción neuromuscular en el modelo murino de esclerosis lateral amiotrófica hSOD1G93A(Universidad Andrés Bello, 2022) Peña Troncoso, Cristopher Gastón; Zundert, Brigitte van; Facultad de Ciencias de la VidaLa esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa que afecta a las motoneuronas (MN), causando debilidad muscular progresiva seguido de la pérdida de movilidad y la muerte de los pacientes. Hasta el día de hoy no existe una cura para esta patología, y los tratamientos disponibles sólo son paliativos. Es por esto que encontrar tratamientos alternativos sería un cambio importante para el mundo de la neurociencia. En nuestro laboratorio, en su búsqueda por encontrar mecanismos o moléculas que gatillan esta enfermedad, en una publicación reciente, se demostró que el polifosfato inorgánico (poliP) es una molécula toxica liberada por astrocitos derivados de modelos ELA y que genera la muerte de MN. PoliP es un polianión constituido por residuos de ortofosfato unidos por enlaces fosfoanhidro, presente en todos los organismos estudiados con un largo de cadena de 3 hasta cientos de residuos. Debido a su neurotoxicidad a nivel extracelular es que actualmente buscamos moléculas candidatas para interactuar con poliP y evaluar su potencial terapéutico para el tratamiento de ELA. Es por esto, que en la presente memoria de título se usó la poliamina espermidina, la cual está cargada positivamente por 3 grupos amino, como una alternativa para interactuar con poliP y con el objetivo inactivar la toxicidad de poliP. La hipótesis de este trabajo es que el tratamiento de ratones modelos de ELA hSOD1G93A (mutSOD1) con espermidina retrasa la disfunción neuromuscular y aumenta la sobrevida debido a la reducción de los niveles tóxicos de poliP en la medula espinal. Los ratones mutSOD1 fueron tratados con espermidina administrada en el agua de beber desde una etapa presintomática hasta el punto final humanitario. El inicio y progresión de los síntomas característicos de la enfermedad se evaluó mediante test de rotarod, además de la variación de peso corporal y sobrevida. Posteriormente, se realizó una inmunofluorescencia en tejidos de la medula espinal lumbar de ratones mutSOD1 tratados con espermidina, en los que se cuantificó los niveles de poliP extracelular e intracelular en astrocitos y MN, mediante el uso de una proteína recombinante denominada recPPBD y se comparó con controles mutSOD1 sin tratamiento. Además, se realizó un ensayo in vitro para evaluar la interacción entre poliP y espermidina usando electroforesis en geles de Urea-PAGE. Los resultados de los parámetros para evaluar la sintomatología no mostraron diferencias significativas entre los ratones mutSOD1 tratados o no tratados con espermidina. Con respecto a los niveles de poliP en la médula espinal, tampoco se obtuvieron diferencias. Sin embargo, no se determinó si esta poliamina llegó al sistema nervioso central mediante la vía de administración elegida, por lo que no podemos concluir su potencial terapéutico sobre los síntomas de la enfermedad ni la capacidad de interacción con poliP.Ítem Patogénesis y degeneración de motoneuronas mediada por la liberación de factores tóxicos musculares en esclerosis lateral amiotrófica(Universidad Andrés Bello, 2019) Martínez Contreras, Pablo Alberto; Zundert, Brigitte vanLa esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa causada por la pérdida progresiva de las motoneuronas(MNs) que lleva a la muerte del paciente entre 2 a 5 años después de la aparición de los primeros síntomas. Tipos celulares no moto neuronales, tales como astrocitos y músculo esquelético, contribuyen a la degeneración y muerte de MNs en ELA. Sin embargo, los mecanismos por los cuales estos tipos de células causan la toxicidad en MNs siguen sin conocerse. En esta tesis investigamos el rol del músculo esquelético en la degeneración y muerte de MNs en un modelo murino de ELA. Encontramos que medios condicionados de miotubos primarios de ratones hSOD1G93A (MCMSOD1G93A) reducen la sobrevida de MNs a través de la liberación de factores tóxicos solubles, gatilla una acumulación de ROSydec-Abl fosforilado, asociado a la degeneración de MNs en un modelo de cultivos primarios de neuronas de médula espinal ventral. Además, los factores tóxicos musculares presentes en el MCM-hSOD1G93A son capaces de generar distalmente un aumento de los eventos de calcio intracelulares, producción de ROS e interesantemente la muerte de MNs en un modelo de micro fluidos. Observamos también, que el MCM-hSOD1G93A produce un déficit funcional del transporte mitocondrial. Finalmente, existe una alteración en el patrón epigenético de miotubos, lo que se correlaciona con la expresión de factores tóxicos musculares. Como estrategia de identificación de los factores tóxicos liberados por el músculo esquelético en ELA establecimos un modelo in vivo de ELA en Drosophilamelanogaster, con expresión selectiva en el músculo de mutaciones en hSOD1. En estas moscas, vimos que la expresión de hSOD1A4V y hSO1G85R es suficiente para causar un déficit motor, similar a lo observado previamente en un modelo de ratón de la enfermedad. Los resultados de esta tesis establecen un nuevo mecanismo no autónomo celular, por el cuál la expresión de mutación es en hSOD1 en músculo esquelético causan la degeneración y muerte de MNs a través de la liberación de factores tóxicos solubles. Además, establecimos un modelo de ELA en moscas que nos permitirá identificar y evaluar la relevancia de posibles factores tóxicos musculares en la patogénesis de ELA.Ítem Remodelación alterada de la cromatina y cambios en la expresión de genes en astrocitos de esclerosis lateral amiotrófica(Universidad Andrés Bello, 2019) Abarzúa Pastene, Sebastián Alejandro; Zundert, Brigitte van; Montecino Leonard, Martín; Facultad de Ciencias de la VidaLa esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa letal que se manifiesta por la pérdida selectiva y progresiva de las motoneuronas. Ha sido reportado que astrocitos de ratón que sobre expresan laSOD1 humana con la mutación G93A (mutSOD1), desencadenan la muerte específica de las motoneuronas. Además, estos astrocitos presentan un aumento global en la transcripción comparado con su control. No se conocen los mecanismos que alteran la regulación transcripcional de los astrocitos mutSOD1. Se ha demostrado que la transcripción en eucariontes es regulada por la cromatina, una estructura especializada que permite empaquetar el “DNA”, protegerlo del daño y regular la actividad de los genes. Específicamente, la marca de histona H3K9me3 permite mediar niveles de empaquetamiento superior de la cromatina. Está reportado que una disminución de marcas represoras,comoH3K9me3,genera pérdida de la estructura de heterocromatina y aumentos a nivel transcripcional, por lo que su mantenimiento es crucial en la regulación del genoma. Por lo tanto, en esta tesis proponemos la siguiente hipótesis: en astrocitos mutSOD1 existe una desorganización de la cromatina, reflejada en una pérdida o redistribución de nucleosomas en regiones que disminuyen la marca H3K9me3, generándose un aumento transcripcional en estos segmentos genómicos. Utilizando una serie de técnicas de secuenciación, “ATAC-seq”, “RNA-seq”y “ChIP-seq”,encontramos que: 1) en astrocitos mutSOD1 se observan masivas alteraciones en la expresión de genes comparado con el wtSOD1, que interesantemente, se asocian a genes específicos de tejidos no relacionados con el SNC, los cuales están aumentados en astrocitosmutSOD1, sugiriendo una trans diferenciación celular; 2) Al analizar la cromatina, encontramos cambios en la distribución delos nucleosomas en regiones no codificantes como LINEs, SINEs y LTRs; y 3) encontramos que la pérdida de la marcaH3K9me3 también ocurre en elementos transponibles, principalmente en las regiones no codificantes SINEs y LTRs. Esto sugiere que la pérdida deH3K9me3 puede generar inestabilidad genómica en astrocitos mutSOD1.Ítem Rol de los hemicanales y las especies reactivas de oxígeno en modelo de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) in vitro(Universidad Andrés Bello, 2017) Cortés Almuna, Nicole Andrea; Zundert, Brigitte van; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaLa Esclerosis Lateral Amiotrófica (ELA) es una devastadora enfermedad neurodegenerativa, caracterizada por la muerte selectiva de las motoneuronas (MNs), lo que lleva a la parálisis y atrofia muscular del paciente, causando la muerte entre los 2 a 5 años desde el diagnóstico, y a la fecha no existe un tratamiento ni cura para la enfermedad. Los mecanismos primarios que desencadenan la ELA son desconocidos, sin embargo, se han observado daños en la mitocondria, agregados de la proteína SOD1, estrés oxidativo, y alteraciones en la homeostasis del calcio, entre otros. Antecedentes muestran que la aplicación de medio condicionado derivado de astrocitos de ratones transgénicos modelos de ELA MCA-hSOD1G93A, produce la muerte de las MNs, altera la actividad de las corrientes de sodio y genera un aumento en la frecuencia de las transientes de calcio, y que antioxidantes previenen la muerte de las MNs. Por otra parte, la literatura muestra que al inhibir los hemicanales (HC) en un modelo de estudio in vivo, se produce un retraso de la enfermedad, por lo que se hipotetiza que el MCA hSOD1G93A es capaz de gatillar la apertura de HC, producir un aumento de calcio y estrés oxidativo, que llevaría a la muerte de MNs. Para determinar esto, se obtuvo MCA hSOD1G93A, el cual fue aplicado a cultivos primarios de NMEV y se evaluó mediante inhibición farmacológica el rol de los HC y la relación con la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS), encontrándose que el MCA hSOD1G93A produce la apertura de HC y el aumento de ROS en NMEV y que éste efecto es prevenido por antioxidantes, y mediado por canales de Nav, y que los HC tienen un rol en la muerte de las MNs. Estos hallazgos muestran una serie de eventos celulares que llevan a la muerte de NMEV donde los astrocitos tienen un rol determinante, lo que abre ventanas para el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas, apuntando a los HC como blanco específico para prevenir o combatir los procesos neurodegenerativos claves en ELA.Ítem Rol del receptor de NMDA NR1NR2B y de la proteína Camkii en la arborización dentritica en neuronas hipocampales in vitro(Universidad Andrés Bello, 2014) Campos Torres, Matías; Zundert, Brigitte van; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaPlasticidad neuronal es considerada como la habilidad de las neuronas para reorganizar su circuito ante estímulos, lo que lleva a la generación de una red neuronal basada en el uso y experiencias. El mecanismo por el cual la plasticidad neuronal disminuye durante el desarrollo es aún desconocido, sin embargo los receptores de glutamato tipo N-metil-0-aspartato (R-NMDA) han sido estudiados ampliamente en este contexto debido a que juegan un rol importante en la plasticidad. Diferentes patrones de activación de estos receptores pueden llevar a una potenciación a largo plazo (LTP) o a una depresión a largo plazo (LTD) de la fuerza sináptica, modelos que hoy se consideran claves en el estudio del aprendizaje y memoria en el cerebro. Se sabe que la plasticidad estructural del árbol dendrítico va perdiendo fuerza a medida que se avanza en etapas del desarrollo, cambiando así la plasticidad neuronal a un refinamiento neuronal. Este término de la plasticidad se ve correlacionado con el cambio de las subunidades de los R-NMDA en la sinapsis durante el desarrollo, de receptores enriquecidos en la subunidad NR28 expresado en sinapsis inmaduras a receptores enriquecidos en la subunidad NR2A expresados en sinapsis maduras. En esta tesis se mostró que la subunidad NR28 es reemplazada por la subunidad NR2A en la sinapsis de neuronas hipocampales durante el desarrollo in vitro y se mostró que el cambio de un tipo de receptor al otro estaría directamente involucrado temporalmente y espacialmente con la pérdida de la plasticidad neuronal. Este fenómeno de desplazamiento va acompañado de otras proteínas involucradas en este proceso, las cuales han sido asociadas a uno u a otra tipo de subunidad de los R-NMDA. Es así como nosotros planteamos que la interacción entre el e-terminal de los R-NMDA y CaMKII en la sinapsis, regula la dendritogénesis en neuronas hipocampales, jugando así un rol importante en la plasticidad neuronal.Ítem Sobrexpresión de las enzimas SUV39H1 y SUV39H2 para aumentar la marca H3K9me3 en astrocitos de esclerosis lateral amiotrófica y reducir la toxicidad del medio condicionado(Universidad Andrés Bello, 2020) Díaz Gamboa, Guillermo Patricio; Zundert, Brigitte van; Montecino Leonard, Martín; Facultad de Ciencias de la VidaLa esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa letal causada por la degeneración de motoneuronas. La aplicación de medios condicionados de astrocitos (MCA) derivados de ratones que expresan superóxido dismutasa 1 humana mutante (hSOD1G93A) a cultivos de neuronas de la médula espinal de tipo silvestre causa la muerte de las motoneuronas. La regulación epigenética ha surgido como un posible mecanismo para explicar la toxicidad de los astrocitos hSOD1G93A , ya que en estos se ha observado una disminución de la marca H3K9me3, así como una disminución de las tri-metiltransferasas SUV39H1 y SUV39H2 encargadas de generar la tri-metilación. En esta tesis se investigó si la sobreexpresión de SUV39H1 y SUV39H2 en los astrocitos hSOD1G93A restaura la marca epigenética H3K9me3 y reduce el efecto tóxico de MCA de hSOD1G93A . Para esto, cultivos de astrocitos fueron infectados con el vector viral AAV2 para sobreexpresar SUV39H1-EGFP y SUV39H2-dTomato, analizar la marca H3K9me3 y colectar MCA para evaluar la sobrevida de las motoneuronas. La sobreexpresión fue evaluada midiendo los niveles de ARNm por RT-qPCR y proteína por western-blot, donde se obtuvo un aumento en los niveles de ARNm de las SUV39H1 y SUV39H2, pero no fue posible visualizar el aumento de las proteínas por western blot. Por otro lado, si fue posible detectar un aumento de las tri-metiltransferasas sobreexpresadas, al observar las proteínas fluorescentes acopladas EGFP y dTomato, con una presencia nuclear. Al analizar la marca H3K9me3 por inmunofluorescencia, se encontró un aumento en astrocitos hSOD1G93A infectados con SUV39H1 y SUV39H2, respecto a los infectados con los constructos control. De manera notable, al evaluar la sobrevida de las motoneuronas utilizando SMI32 y MAP2 como marcadores de motoneuronas y neuronas, respectivamente, se encontró un aumento en la sobrevida de motoneuronas expuestas al MCA proveniente de astrocitos hSOD1G93A que sobreexpresan las tri-metiltransferasas. Estos hallazgos indican que la sobreexpresión de SUV39H1 y SUV39H2 aumenta la marca H3K9me3 y disminuye la toxicidad del MCA hSOD1G93A tratado, lo que evidenciaría que el reordenamiento epigenético modelado por las tri-metiltransferasas SUV39H1 y/o SUV39H2 podría ser un blanco terapéutico en la patología ELA.