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Ítem Identification of a common secondary mutation in the Neurospora crassa knockout collection conferring a cell fusion-defective phenotype(American Society for Microbiology, 2023-10) Montenegro-Montero, Alejandro; Goity, Alejandra; Canessa, Paulo F.; Larrondo, Luis F.Gene-deletion mutants represent a powerful tool to study gene function. The filamentous fungus Neurospora crassa is a well-established model organism, and features a comprehensive gene knockout strain collection. While these mutant strains have been used in numerous studies, resulting in the functional annotation of many Neurospora genes, direct confirmation of gene-phenotype relationships is often lacking, which is particularly relevant given the possibility of background mutations, sample contamination, and/or strain mislabeling. Indeed, spontaneous mutations resulting in phenotypes resembling many cell fusion mutants have long been known to occur at relatively high frequency in N. crassa, and these secondary mutations are common in the Neurospora deletion collection. The identity of these mutations, however, is largely unknown. Here, we report that the Δada-3 strain from the N. crassa knockout collection, which exhibits a cell fusion defect, harbors a secondary mutation responsible for this phenotype. Through whole-genome sequencing and genetic analyses, we found a ~30-Kb deletion in this strain affecting a known cell fusion-related gene, so/ham-1, and show that it is the absence of this gene—and not of ada-3—that underlies its cell fusion defect. We additionally found three other knockout strains harboring the same deletion, suggesting that this mutation may be common in the collection and could have impacted previous studies. Our findings provide a cautionary note and highlight the importance of proper functional validation of strains from mutant collections. We discuss our results in the context of the spread of cell fusion-defective cheater variants in N. crassa cultures. IMPORTANCE This study emphasizes the need for careful and detailed characterization of strains from mutant collections. Specifically, we found a common deletion in various strains from the Neurospora crassa gene knockout collection that results in a cell fusion-defective phenotype. This is noteworthy because this collection is known to contain background mutations—of a largely unclear nature—that produce cell fusion-defective phenotypes. Our results describe an example of such mutations, and highlight how this common genetic defect could have impacted previous studies that have used the affected strains. Furthermore, they provide a cautionary note about the use of Neurospora strains with similar phenotypes. Lastly, these findings offer additional details relevant to our understanding of the origin and spread of cell fusion-defective cheater variants in N. crassa cultures. Copyright © 2023 Montenegro-Montero et al.Ítem The cotranscribed Salmonella enterica sv. Typhi Tsx and impX genes encode opposing nucleoside-specific import and export proteins(Genetics Society of America [Society Publisher] Oxford University Press [University Publisher], 2006-05) Bucarey, S.; Villagra, N.; Fuentes, J.The Salmonella enterica tsx gene encodes a nucleoside-specific outer membrane channel. The Tsx porin is essential for the prototrophic growth of S. enterica sv. Typhi in the absence of nucleosides. RT-PCR analysis shows that the tsx gene is cotranscribed with an open reading frame unique to S. enterica, impX (STY0450), which encodes an inner membrane protein 108 amino acids in length, which is predicted to have only two transmembrane α-helices. Fusions of the lacZ gene to both tsx and impX reveal that the transcription of both genes is induced in the presence of adenosine. A null mutation in the S. Typhi impX gene suppresses the induced auxotrophy for adenosine or thymidine resulting from a tsx mutation and confers sensitivity to high concentrations of adenosine or thymidine. The ImpX protein, when tagged with a 3xFLAG epitope, is functional and associates with the inner membrane; impX mutants are defective in the export of 3H-radiolabeled thymidine. Taken together, these and other results suggest that the S. Typhi Tsx porin and ImpX inner membrane protein facilitate competing mechanisms of thymidine influx and efflux, respectively, to maintain the steady-state levels of internal nucleoside pools.Ítem Conservación de anfibios de Chile: memorias del taller de conservación de anfibios para organismos públicos(Universidad Andrés Bello, 2012) Soto-Azat, Claudio; Valenzuela-Sánchez, AndrésLos anfibios han dado origen a toda la diversidad de vertebrados presentes en la tierra, incluyendo a nosotros, los seres humanos. Los anfibios mantienen los ecosistemas equilibrados y controlan de forma natural las plagas de insectos. Debido a la naturaleza permeable de su piel, son los primeros en desparecer cuando el agua está contaminada, lo que los hace excelentes indicadores de la salud del ecosistema. Desafortunadamente, los anfibios enfrentan una crisis de extinción y declinación de poblaciones, sin precedentes. Un tercio de los anfibios están amenazados de extinción. Producto del constante crecimiento humano, la pérdida de sus hábitats se ha incrementado a tasas insospechadas en los últimos años, y la globalización a facilitado la introducción de especies invasoras y los ha dejado expuestos a patógenos nuevos con efectos catastróficos para algunas poblaciones. Por otro lado, el calentamiento global es reconocido como una nueva amenaza con insospechados efectos sobre este grupo de animales altamente dependientes del agua. Chile presenta una batracofauna más bien pequeña cuando se compara con otros países de Sudamérica, sin embargo que se caracteriza por su alto grado de endemismo, con diversas formas y tamaños que han evolucionado de forma independiente y con especies adaptadas a vivir en ambientes bastante desiguales, desde el árido norte, las alturas de los Andes, pasando por la zona mediterránea, llegando a los bosques templados y fríos del sur de Chile. En los últimos años se ha producido un explosivo aumento en la investigación de anfibios de nuestro país, y así han surgido también nuevas problemáticas para su conservación. El continuo aumento de la invasión de la rana Africana, la reciente descripción del hongo Batrachochytrium dendrobatidis causante de la chytridiomicosis de los anfibios, la descripción de nuevas especies y la aplicación de nuevas técnicas en estudios genéticos, son solo algunos ejemplos de nuevos desafíos de la conservación de los anfibios en Chile. Como un ejemplo puntual, una situación alarmante en la batracofauna chilena se visualiza en el género Telmatobius que en su mayoría son especies riparianas que viven en arroyos cordilleranos de la región desértica y la de puna seca. El género en su totalidad esta en peligro de extinción, por la destrucción del ambiente ya sea por efecto de las mineras, sustracción de aguas y canalización de los pocos arroyos existentes en la zona. Se suma a esto que la taxonomia del género es incierta y no ha sido estudiada en su conjunto, conociéndose la mayoría de las especies solo en la localidad tipo. En este contexto, la organización del taller de Conservación de anfibios para organismos públicos, realizado en la Universidad Andrés Bello los días 7 y 8 de Julio de 2011, buscó ser una plataforma de información y discusión sobre estos temas con aquellas personas encargadas de su protección, gestión y conservación. Esperamos que este libro sea un aporte al conocimiento y protección de la biodiversidad.