Sobrexpresión de las enzimas SUV39H1 y SUV39H2 para aumentar la marca H3K9me3 en astrocitos de esclerosis lateral amiotrófica y reducir la toxicidad del medio condicionado

Vista sencilla de ítem
dc.contributor.advisorZundert, Brigitte van
dc.contributor.advisorMontecino Leonard, Martín
dc.contributor.authorDíaz Gamboa, Guillermo Patricio
dc.contributor.editorFacultad de Ciencias de la Vida
dc.date.accessioned2021-07-19T21:31:13Z
dc.date.available2021-07-19T21:31:13Z
dc.date.issued2020
dc.descriptionTesis (Magíster en Biotecnología y Ciencias de la Vida)es
dc.description.abstractLa esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa letal causada por la degeneración de motoneuronas. La aplicación de medios condicionados de astrocitos (MCA) derivados de ratones que expresan superóxido dismutasa 1 humana mutante (hSOD1G93A) a cultivos de neuronas de la médula espinal de tipo silvestre causa la muerte de las motoneuronas. La regulación epigenética ha surgido como un posible mecanismo para explicar la toxicidad de los astrocitos hSOD1G93A , ya que en estos se ha observado una disminución de la marca H3K9me3, así como una disminución de las tri-metiltransferasas SUV39H1 y SUV39H2 encargadas de generar la tri-metilación. En esta tesis se investigó si la sobreexpresión de SUV39H1 y SUV39H2 en los astrocitos hSOD1G93A restaura la marca epigenética H3K9me3 y reduce el efecto tóxico de MCA de hSOD1G93A . Para esto, cultivos de astrocitos fueron infectados con el vector viral AAV2 para sobreexpresar SUV39H1-EGFP y SUV39H2-dTomato, analizar la marca H3K9me3 y colectar MCA para evaluar la sobrevida de las motoneuronas. La sobreexpresión fue evaluada midiendo los niveles de ARNm por RT-qPCR y proteína por western-blot, donde se obtuvo un aumento en los niveles de ARNm de las SUV39H1 y SUV39H2, pero no fue posible visualizar el aumento de las proteínas por western blot. Por otro lado, si fue posible detectar un aumento de las tri-metiltransferasas sobreexpresadas, al observar las proteínas fluorescentes acopladas EGFP y dTomato, con una presencia nuclear. Al analizar la marca H3K9me3 por inmunofluorescencia, se encontró un aumento en astrocitos hSOD1G93A infectados con SUV39H1 y SUV39H2, respecto a los infectados con los constructos control. De manera notable, al evaluar la sobrevida de las motoneuronas utilizando SMI32 y MAP2 como marcadores de motoneuronas y neuronas, respectivamente, se encontró un aumento en la sobrevida de motoneuronas expuestas al MCA proveniente de astrocitos hSOD1G93A que sobreexpresan las tri-metiltransferasas. Estos hallazgos indican que la sobreexpresión de SUV39H1 y SUV39H2 aumenta la marca H3K9me3 y disminuye la toxicidad del MCA hSOD1G93A tratado, lo que evidenciaría que el reordenamiento epigenético modelado por las tri-metiltransferasas SUV39H1 y/o SUV39H2 podría ser un blanco terapéutico en la patología ELA.es
dc.identifier.urihttp://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/19429
dc.language.isoeses
dc.publisherUniversidad Andrés Belloes
dc.subjectEnzimases
dc.subjectEsclerosis Lateral Amiotróficaes
dc.titleSobrexpresión de las enzimas SUV39H1 y SUV39H2 para aumentar la marca H3K9me3 en astrocitos de esclerosis lateral amiotrófica y reducir la toxicidad del medio condicionadoes
dc.typeTesises
Archivos
Bloque original
Mostrando 1 - 1 de 1
No hay miniatura disponible
Nombre:
a132563_Diaz_G_Sobrexpresion_de_las_enzimas_2020_Tesis.pdf
Tamaño:
2.92 MB
Formato:
Adobe Portable Document Format
Descripción:
TEXTO COMPLETO EN ESPAÑOL
Descargar
Bloque de licencias
Mostrando 1 - 1 de 1
No hay miniatura disponible
Nombre:
license.txt
Tamaño:
1.71 KB
Formato:
Item-specific license agreed upon to submission
Descripción:
Descargar
Colecciones
Fac.CV - Trabajos de Titulación Post-Grado