Fac.CV - Trabajos de Titulación Post-Grado
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Ítem Estudio comparativo de rusticianinas en microorganismos acidófilos/halotolerantes(Universidad Andrés Bello, 2015) Lazcano Olmos, Marcelo; Holmes, David; Saavedra, Claudia; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaLa biolixiviación representa una vía económica atractiva para recuperar cobre especialmente de minerales de baja ley. Chile es sin duda una potencia mundial en el desarrollo de la tecnología de biolixiviación. Sin embargo, un gran desafio para la industria de la biolixiviación es la dificultad de obtener el agua dulce requerida para este proceso. Esto también es un problema en otros países, como Australia, donde la biolixiviación es llevada a cabo en zonas áridas. Usar agua salina, particularmente agua derivada del océano, para reemplazar el agua dulce podría mitigar el problema. Sin embargo, muchos microorganismos usados en los procesos de biolixiviación convencional no crecen en condiciones salinas. Esta tesis explica cómo la rusticianina, una proteína clave de transferencia de electrones, es capaz de funcionar en bacterias tolerantes a sal (halotolerantes) como Acidihalobacter prosperus DSM 5130 y Acidiferrobacter murciensis SPIII/3. Una comparación bioinformática de las proteínas rusticianina de estas dos bacterias halófilicas con proteínas rusticianinas homólogas de microorganismos biolixiviantes no tolerante a sal como Acidithiobacillus ferrooxidans fue realizado con el fin de evaluar si habían cambios aminoacídicos y/o modificaciones estructurales que pudiesen ayudar a explicar la tolerancia de sal de rusticianinas en A. prosperus y A. murciensis. La investigación se realizó usando varios programas bioinformáticas disponibles en internet. RAST fue utilizado para anotar los genomas de A. prosperus y A. murciensis, permitiendo la predicción de genes codificantes de rusticianina y proteínas asociadas con el complejo rusticianina. Las proteínas predichas de estos genes fueron curadas a mano usando un número de programas para la predicción de propiedades de proteínas incluyendo BLAST, PFAM, TMMPRED y PSORT. MAFFT y MEGA fueron utilizados para construir árboles filogenéticos. Swiss-Model fue utilizado para crear modelos estructurales de las diferentes rusticianinas, las cuales fueron visualizadas con Swiss-PDBViewer. Se realizó una búsqueda, en bases de datos, de genomas de microorganismos que contengan genes codificadores de proteínas potencialmente oxidadoras de hierro, incluyendo la rusticianina. La búsqueda reveló dos organismos halotolerante similares a A. ferrooxidan A. prosperus y A. murciencis. En contraste con A. ferrooxidan que contiene solo una copia de rusticianina, A. prosperus y A. murciencis contienen dos y tres copias respectivamente. Una comparación del modelo de rusticianina, correspondiente a A. sugiere que las cinco rusticianinas de los halofilicos conservan el sitio de cobre involucrado en la transferencia de electrones, pero cada una de estas rusticianina muestra cambios aminoacídicos alrededor del sitio de unión a cobre, principalmente tienen una tendencia a aumentar los residuos cargados positivamente. Adicionalmente, un aumento de residuos cargados fue detectado en la superficie de estas proteínas. El modelo presentado sugiere cómo éstas modificaciones podrían estabilizar la msticianina en presencia de concentraciones altas de sal. El modelo presenta predicciones que se podrían comprobar en futuras investigaciones experimentales y allana el camino para una mayor investigación en la microbiología de biolixiviación en condiciones salinas.Ítem Efecto de mutagénesis en sitios potenciales de fosforilación de la proteína X del virus de la hepatitis B, sobre la replicación del genoma viral(Universidad Andrés Bello, 2016) Jiménez Alarcón, Gustavo Adolfo; Villanueva Arancibia, Rodrigo Alejandro; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaEl virus de la Hepatitis B (HBV) posee un genoma circular parcial de DNA doble hebra, que codifica 4 marcos de lectura abiertos. Dentro de estos 4 marcos se encuentra HBx la cual es una proteína involucrada en la regulación de la replicación viral, aunque se desconocen sus mecanismos de acción. Nuestro trabajo está enfocado en estudiar la regulación de la replicación viral que ejerce HBx dependiente de fosforilación en residuos filogenéticamente conservados, y con alta probabilidad de fosforilación, como son Ser25, Ser41, y Thr81. Para esto, construimos vectores de expresión de HBx mutantes en sitios de fosforilación, y adicionalmente un clon molecular del genoma de HBV que no expresa HBx (HBV X-). Con esto, hemos generado un sistema de replicación de HBV en líneas celulares de hepatoma humano (Huh-7 o HepG2) donde HBV X(-) pueda ser complementado en trans con HBx mutantes. Los resultados obtenidos demuestran que la replicación viral es dependiente de HBx en línea celular HepG2, además los datos de transcomplementación muestran importantes cambios en niveles de replicación viral dependientes de la fosforilación de HBx como lo observamos a través de la cuantificación de intermediarios replicativos de DNA viral tanto citoplasmáticos como nucleares y por la secreción de antígenos virales HBsAg y HBeAg. Estos resultados sugieren que los estados de fosforilación de la proteína HBx podrían regular la replicación viral.Ítem Efecto del sistema de dos componentes PhoP/PhoQ en la regulación de la expresión del factor sigma alternativo RpoS bajo distintas condiciones de estrés en salmonella entérica Serovar Typhi(Universidad Andrés Bello, 2011) Morgado Galdames, Juan Alberto; Mora Longa, Guido; Fuentes Aravena, Juan; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaEl género Salmonella comprende dos especies: Salmonella bongori y Salmonella enterica. Esta última abarca seis subespecies, dentro de las cuales se encuentra la subespecie enterica (I), la cual agrupa a las Salmonelas causantes de enfermedades en animales homeotermos, como es el caso de S. Typhi, que es el agente causal de la fiebre tifoidea en el humano. La fiebre tifoidea es una enfermedad del sistema retículo-endotelial, caracterizada por una fiebre alta, que puede causar la muerte del paciente cuando no es tratada oportunamente. La infección con S. Typhi comienza con la ingestión de comidas o aguas contaminadas. Una vez que la bacteria ha llegado al intestino, invade las células del epitelio, donde puede entrar al torrente sanguíneo del hospedero para diseminarse en órganos profundos como el hígado, el bazo y/o la médula ósea. Durante el proceso de infección, S Typhi debe enfrentar diferentes tipos de estrés. Para poder enfrentar las diferentes condiciones, las bacterias se deben enfocar en la expresión de genes que le permitan. Para modular la expresión de genes, las bacterias se valen de factores sigma alternativos y de reguladores transcripcionales, incluyendo los implicados en los sistemas de dos componentes. Los factores sigma de la RNA polimerasa tienen la función de reconocer los promotores de diferentes genes blancos. Dependiendo de la condición ambiental se utilizará un factor sigma determinado, el cual reconocerá y activará la transcripción de un grupo especial de genes, logrando la supervivencia de la bacteria en diferentes tipos de estrés. Dentro de los factores sigma se encuentra el factor sigma alternativo RpoS, el cual se activa en fase logarítmica tardía alcanzando un máximo en fase estacionaria, además de activarse en pH ácido, shock osmótico, limitación de nutrientes y shock térmico, entre otras condiciones. Los sistemas de dos componentes son una organización de proteínas, correspondiente a un sensor de membrana, encargado de sensar las condiciones ambientales y acoplarlas a un regulador de respuesta que va a generar la regulación de sus genes blanco. Dentro de estos se encuentra el sistema de dos componentes PhoP/PhoQ, que se activa en un medio con baja concentración de magnesio, donde PhoQ es el sensor de membrana y PhoP el regulador de respuesta. En este trabajo, se hipotetizó que el sistema de dos componentes PhoP / PhoQ está implicado en la regulación de la expresión de RpoS en S. Typhi. En esta tesis se examinó la regulación del sistema de dos componentes PhoP/PhoQ sobre RpoS, en diferentes condiciones de crecimiento, donde está descrito que existe una activación de éste factor sigma y/o de PhoP / PhoQ. Los análisis de expresión proteica demuestran que la ausencia de phoP, aumenta los niveles de RpoS. Además el aumento del número de copias de phoP disminuye la cantidad de RpoS. Los niveles proteicos anteriores se asociaron a la supervivencia a estrés oxidativo causado por H2O2, demostrando que la ausencia de phoP produce mayor supervivencia de las bacterias y el aumento en el número de copias de phoP tiene un efecto negativo en la supervivencia. Los resultados anteriores también fueron corroborados por el análisis de la activación del promotor de un gen dependiente de RpoS e independiente de phoP. Los resultados sugieren que el sistema de dos componentes PhoP/PhoQ produce una regulación negativa sobre el factor sigma alternativo RpoS en S. Typhi.Ítem Rol del sistema de dos componentes BaeSR de Salmonella Typhimurium en la regulación de la expresión de las catalasas frente a ciprofloxacino(Universidad Andrés Bello, 2013) Álvarez Espinosa, Ricardo Hernán; Gil Michell, Fernando Rafael.; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Bioquímica.Para llevar a cabo una infección exitosa, Salmonella Typhimurium (S. Typhimurium) debe adaptarse a diversos cambios medioambientales en el hospedero, por lo que debe ser capaz de detectar y responder ante distintos estímulos, siendo los sistemas de dos componentes (SDC) uno de los mecanismos usado con este fin. Están compuestos por una proteína anclada a la membrana interna (sensor) y una proteína citosólica (regulador de respuesta). Los SDC han sido ampliamente relacionados con la resistencia bacteriana a antibióticos. Uno de estos SDC es BaeSR, donde BaeS es el sensor y BaeR es el regulador de respuesta, y en conjunto participan en la respuesta a los antibióticos bactericidas novobiocina y ciprofloxacino (CIP). A través de un mecanismo de acción secundario, estos antibióticos estarían provocando la muerte de la bacteria, mediante un aumento de las especies reactivas de oxígeno, entre las que se encuentra el peróxido de hidrógeno. Las enzimas encargadas de la degradación de este radical son las catalasas, donde en S. Typhimurium se han descrito 3 tipos: KatE, KatG y KatN, que se expresan diferencialmente según la fase de crecimiento. Por medio de un análisis in silico se encontraron posibles sitios de unión de BaeR, en los promotores de las tres catalasas. El objetivo de esta Tesis fue demostrar que BaeSR participa en la respuesta frente a CIP en S. Typhimurium, por medio de la inducción de la expresión de las catalasas. Los resultados demostraron que los niveles de ROS totales y actividad catalasa, específicamente de KatE, son regulados positivamente por BaeSR frente a CIP, en fase exponencial. Además, se determinó que esta regulación es indirecta, ya que BaeR no se une al promotor de katE.Ítem Evaluación de la viabilidad y muerte celular en oligodendrocitos de la progenie gestada en madres hipotiroideas, en respuesta a moléculas inflamatorias(Universidad Andrés Bello, 2012) Albornoz Balmaceda, Eduardo Alfonso.; Riedel S., Claudia.; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Bioquímica.Las hormonas tiroideas 3,5,3 L-tri-yodotironina (T3) y 3,5,3"5"-L-tetrayodo-tironina (T4) son producidas por la glándula tiroides, y son las principales responsables de la regulación del metabolismo basal. La disminución de los niveles normales de estas hormonas durante la gestación (hipotiroidismo gestacional) puede afectar de forma considerable el desarrollo normal del sistema nervioso central (SNC) del embrión. Alterando entre otros procesos, al sistema inmune de la progenie y la diferenciación de células precursoras de oligodendrocitos (OPC) a oligodendrocitos maduros. Los oligodendrocitos son células gliales encargadas de la mielinización del SNC. Estas células son el principal blanco de la esclerosis múltiple (EM), enfermedad autoinmune desmielinizante e invalidante, cuya etiología es desconocida y multifactorial. La EM presenta una alta incidencia a nivel mundial, afectando a más de 1,1 millones de personas, con una prevalencia en Chile de 11,7 enfermos por cada mil habitantes, situando a esta patología como la primera causa de discapacidad neurológica no traumática en adultos jóvenes. La relación entre hipotiroidismo gestacional y el desarrollo o progresión de EM en la progenie no se encuentra descrita, nosotros pensamos que el hipotiroidismo gestacional podría provocar un daño en la progenie que se mantenga en el tiempo y afecte el desarrollo o curso de la EM en la progenie adulta. Basado en esta idea nosotros proponemos la siguiente hipótesis: "El hipotiroidismo durante la gestación afecta de forma permanente a los oligodendrocitos de la progenie, siendo estos más sensibles a la muerte celular y a disminuir su viabilidad en respuesta a moléculas inflamatorias". Para evaluar esta hipótesis se realizaron experimentos in vivo mediante la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) en ratones. En este trabajo demostramos que el EAE, que es un modelo experimental de EM, la progenie gestada en madres hipotiroideas desarrolla un EAE más severo en comparación con la progenie gestada en madres eutiroídeas. Se observó mayor desmielinización, un aumento en el infiltrado inflamatorio en el SNC y un aumento en la muerte de oligodendrocitos. Además, se realizaron experimentos in vitro usando cultivos primarios de oligodendrocitos. Los resultados obtenidos en la parte vitro se corroboraron con los resultados usando el modelo vivo. Observamos que en cultivos primarios de oligodendrocitos obtenidos a partir de crías gestadas en madres con hipotiroidismo e incubadas con el factor de necrosis tumoral alfa (TNFa) presentaron disminuida la viabilidad y aumentada la muerte celular en comparación a los cultivos provenientes de crías gestadas en madres eutiroídeas. Estos resultados sugieren por primera vez que el hipotiroidismo gestacional influye en la progresión del EAE en el SNC de la progenie. Este efecto estaría mediado por la predisposición de los oligodendrocitos a disminuir su viabilidad frente a procesos inflamatorios. Estos datos apoyan la necesidad de evaluar los niveles de hormonas tiroideas maternas y tratar las deficiencias de éstas durante la gestación para prevenir alteraciones en la vida adulta.Ítem Efecto de la aclimatación sobre el tiempo de colapso de Aegla spp en ríos de la zona centro-sur de Chile(Universidad Andrés Bello, 2023) Carroz Colman, Jesús Guillermo.; Carter Montecinos, Mauricio José.; Facultad de Ciencias de la Vida.El cambio climático está provocando respuestas biológicas a escala mundial impulsando organismos de agua dulce a cambiar sus rangos de distribución para mantenerse dentro de sus condiciones ambientales óptimas. La aclimatación es un mecanismo relevante para afrontar el cambio climático, el cual se define como cualquier modificación de un rasgo fisiológico de un genotipo en respuesta a cambios de una variable ambiental. Dentro de estos cambios, se encuentra la aclimatación térmica, que puede ocurrir cuando hay exposición prolongada a un aumento de temperatura que provoca cambios como el incremento del CTmax. El límite superior de tolerancia a mayores temperaturas puede ser descrito por CTmax y z (sensibilidad térmica), que pueden ser observados en curvas de temperatura (TDT), donde el tiempo de colapso es considerado de manera explícita. Se ha sugerido un posible compromiso entre una alta sensibilidad térmica y poseer un bajo límite térmico. En Chile habitan 18 especies del género Aegla, las cuales están amenazadas por alteración del hábitat por acción antrópica. En esta investigación se realizó un experimento de estrés térmico agudo a individuos de Aegla spp de tres ríos de la zona centro-sur de Chile, para determinar si el tiempo de colapso varía con el CTmax en distintas condiciones de aclimatación, a 13 y 23 °C. Se obtuvieron diferencias en el z, 4.93 y 2.18 °C para individuos aclimatados en frío y calor, respectivamente. Debido a esto, se registró un mayor tiempo de colapso para los individuos aclimatados en calor. Además, estos tienen una tolerancia al calor favorable en cuatro escenarios térmicos. De acuerdo con esto, se sugiere que la aclimatación en calor es un factor relevante para contrarrestar los aumentos de temperaturas del ambiente, pues permite mejorar la tolerancia térmica y así persistir ante el cambio climático.Ítem Identificación de ARN no codificantes pequeños (sARN) que regulan el desarrollo del fruto en Prunus persica [L.] Batsch(Universidad Andrés Bello, 2024) Torrejón Madariaga, Valentina Paz; Meneses, Claudio; Sáez Aguayo, Susana; Facultad de Ciencias de la VidaPrunus persica (P. persica) es un árbol frutal perteneciente a la familia de las Rosaceae. Los frutos tienen características organolépticas y nutricionales generando alta demanda. Por su parte, Chile se encuentra en el primer lugar de Sudamérica y cuarto a nivel mundial en exportación de duraznos y nectarines (P. persica). Dado que estos frutos tienen importancia económica y social, es de interés generar nuevas variedades que satisfagan las necesidades agronómicas y comerciales de la industria. P. persica es considerado un organismo modelo por poseer un genoma diploide y pequeño (265 Mpb), distribuido en 8 cromosomas. Además, su genoma está secuenciado y disponible. Los frutos presentan cualidades climatéricas reflejadas en el rápido ablandamiento del fruto luego de ser cosechado. El desarrollo del fruto se caracteriza por presentar 4 etapas representadas en una curva doble sigmoidea (S1, S2, S3, S4). Por esto, se determina un momento de madurez fisiológica y una fecha de cosecha (MD; del inglés “Maturity Date”) para cada variedad. Por su parte, el proceso de desarrollo del fruto es regulado por varias fitohormonas (ácido jasmónico, etileno, giberelinas, citoquininas) y en particular, el ácido jasmónico participa activando vías relacionadas con la pérdida de firmeza de la pulpa por el desensamblaje de la pared celular y en el endurecimiento del carozo. Las secuencias no codificantes de ARN (ncARN) no son capaces de traducirse a proteínas, pero si influyen en la expresión de genes. Dentro de los ncARN, se encuentran los microARN (miARN), ARN de interferencia (siARN), ARN asociado a Piwi (piARN) y ARN no codificante de cadena larga (lncARN). A su vez los miARN y siARN presentan secuencias cortas con 21-26 pb. Por esta razón, se consideran como ARN no codificantes pequeños (sARN). Además, se ha descrito que miARN y siARN presentan funciones regulatorias a nivel post-transcripcional. Las plantas presentan microARN, éste comprende una vía de biogénesis que forma un complejo de silenciamiento inducido por miARN maduro (miRISC). El Laboratorio de Agrogenómica (PUC) realizó un análisis bioinformático previo enfocado en las interacciones entre vías hormonales y epigenéticas (metiloma) durante el desarrollo del fruto, seleccionando genes candidatos relacionados con las rutas de biosíntesis de ácido jasmónico involucrados en el desarrollo del fruto. Considerando todo lo anterior, la hipótesis propuesta es: MicroARNs contribuyen en la regulación de genes involucrados en rutas metabólicas de ácido jasmónico durante el desarrollo del fruto en Prunus persica, explicando las diferencias entre variedades contrastantes para fecha de cosecha. Así, el objetivo general es identificar microARN que regulan el proceso de desarrollo y maduración de fruto en variedades contrastantes para fecha de cosecha en P. persica. En primera instancia, la estrategia experimental consiste en un análisis bioinformático para identificar microARNs expresados diferencialmente en variedades contrastantes (‘Early Juan’ y ‘Super August’) para fecha de cosecha en P. persica. Luego, se analizará la co-expresión entre microARN y mARN expresados diferencialmente durante desarrollo de fruto para las mismas variedades. Finalmente, validamos los genes candidatos mediante técnicas de RT-qPCR.Ítem Estudio teórico-experimental de la contribución del oligosacárido central del Lipopolisacárido a la integridad de la membrana externa de Escherichia y Salmonella typhimurium(Universidad Andrés Bello, 2017) Alarcón Torres, Mackarenna Stefanie; Aguayo Villegas, Daniel Rodrigo; Facultad de Ciencias Biológicas.La capa de LPS de la ME de bacterias Gram negativo es afectada tanto por agentes liotrópicos como por factores termotrópicos que alteran su integridad y función. Por medio de Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC) y simulación molecular, se estudió la contribución de los componentes del Oligosacárido central (OC) en la estabilidad e integridad de la ME y su relación con la resistencia a antibióticos. Para esto se caracterizó las temperaturas de transición de fase (Tm) de vesículas artificiales de LPS extraídos de las cepas AwaaF, AwaaQ, AwaaP y silvestre E. coli BW25113 y de S. typhimurium y sus mutantes OwaaL, Owaal, OwaaG. Los valores de Tm obtenidos y su relación con el quimiotipo de cada LPS indican que las modificaciones en el OC afectan tanto la Tm como el rango de transición de fase (RTm) de las vesículas, donde las cepas OwaaP, AwaaQ y silvestre de E. coli sufren los mayores cambios en su Tm y RTm. Mediante simulaciones de Dinámica Molecular se relacionaron los resultados obtenidos por DSC con la conformación adoptada a nivel atómico de bicapas formadas por LPS representativos de los quimiotipos OwaaP, AwaaQ y silvestre. En concordancia con los resultados de DSC, el análisis del parámetro de segundo orden de las cadenas aciles de cada LPS mostró cambios en la fase adoptada por estas bicapas, donde a 37 °C los LPS silvestre y AwaaQ se encontrarían en fase cristalina-liquida, mientras que el LPS OwaaP lo haría en fase lamelar. Además, el mayor valor de Tm del LPS OwaaP (47 °C) y la del LPS AwaaQ (23 °C) relacionan con la modificación de los ángulos de torsión de los enlaces glucosídicos del LPS, producto de los cambios conformacionales tanto a nivel de monómero como supramoleculares promovidos por la ausencia de residuos específicos a nivel del OC. Estos resultados permiten explicar el cambio en la permeabilidad de membrana frente a diferentes agentes, como también la susceptibilidad a distintos antibióticos, procesos a los que no solo contribuye el Lípido A, sino también son afectados por la composición del OC.Ítem Condiciones de alta osmolaridad impactan en la ruta y cinética de internalización de las vesículas de membrana externa (OMVs) de Salmonella Typhi en células epiteliales(Universidad Andrés Bello, 2023) Rojas Jacob, Diego Ignacio; Fuentes Aravena, Juan; Facultad de Ciencias de la VidaLas vesículas de membrana externa (OMVs) son nanoproteoliposomas que van desde los 20 hasta los 500 nm aproximadamente. Estas OMVs son liberadas desde la membrana externa (OM) de bacterias Gram negativo, lo que no implica lisis celular o muerte de la bacteria. Las OMVs actúan como vehículo de diversos factores al tener la capacidad de internalizarse en la célula hospedera. Por ello, las OMVs pueden ser usadas en aplicaciones biotecnológicas que requieran la entrega de biomoléculas, destacando la importancia de este trabajo. Esta vía de exportación presenta ventajas sobre otros mecanismos secretores, como la protección y/o entrega a distancia del cargamento. La internalización de las OMVs en células eucariontes esta mediada por diferentes rutas de entrada. Actualmente la endocitosis se puede subdividir en macropinocitosis, dependiente de clatrina, dependiente de caveolina, independiente de clatrina e independiente de caveolina. Estas rutas son utilizadas por las OMVs para internalizarse en la célula blanco, siendo el cargamento proteico y el tamaño de las OMVs características importantes para determinar dicha ruta de internalización afectando la cinética de internalización en la célula blanco. Estas características de las OMVs pueden variar dependiendo de las condiciones en la cual crezca la bacteria parental. Estudios realizados en S. Typhimurium demuestran que OMVs extraídas de cultivos crecidos en bajo magnesio poseen un cargamento proteico distinto en comparación a condiciones estándar de laboratorio (Luria Bertani). También, resultados obtenidos en el laboratorio señalan que OMVs obtenidas de condiciones de alta osmolaridad presentan diferencias en el rango de tamaño. Por lo que es plausible sugerir que cambios en la condición de cultivo puede impactar tanto en el cargamento proteico como en el tamaño de las OMVs. S. enterica serovar Typhi (S. Typhi) es una bacteria Gram negativo causante de la fiebre tifoidea en humanos. En el transcurso de la infección, S. Typhi se enfrenta a distintos microambientes dependiendo de donde se encuentre el patógeno. Al llegar al intestino la bacteria se enfrenta a diversas señales ambientales, donde uno de los más relevantes para este estudio es la alta osmolaridad. Estudios señalan que la alta osmolaridad (300 mM NaCl) aumenta la adherencia de S. Typhi a células epiteliales, lo cual es relevante para su invasión en las células eucariontes. En consiguiente, resultados no publicados obtenidos en el laboratorio demuestran que OMVs extraídas de S. Typhi en condiciones de alta osmolaridad (300 mM NaCl) presentan un perfil proteico distintos a la condición estándar de laboratorio. Lo que podría impactar en la ruta de entrada y la cinética de internalización de las OMVs en la célula hospedera. Por lo tanto, nosotros hipotetizamos en este estudio que las OMVs de S. Typhi presentan una variación en la ruta de entrada y la cinética de internalización en células epiteliales en condiciones de alta osmolaridad. Se compararon OMVs de S. Typhi purificadas en condiciones de baja y alta osmolaridad (0 mM y 300 mM respectivamente). El perfil proteico se estudió por SDS-PAGE y proteómica. El tamaño mediante microscopía de transmisión electrónica (TEM). La determinación de la ruta endocítica mediante citometría de flujo e inmunofluorescencia y la cinética de internalización por citometría de flujo. Encontramos que cambios en la osmolaridad del ambiente cambia las principales características de las OMVs de interés para nuestro estudio, como el cargamento proteico, la distribución de tamaño y el potencial zeta. Sin embargo, no hubo un cambio en la ruta endocítica de las OMVs extraídas en las distintas condiciones de cultivo ni tampoco en la cinética de internalización. Como conclusión, encontramos que el cambio de la osmolaridad en el ambiente tiene un impacto tanto en el cargamento proteico, tamaño y potencial zeta de las OMVs de S. Typhi, pero esto no afecta ni en su ruta de internalización ni en su cinética de internalización en celulas epiteliales en cultivo.Ítem Aislamiento, caracterización y análisis de diversidad en simbiontes de medicago sativa cultivada en suelos contaminados por cobre(Universidad Andrés Bello, 2014) Ahumada Sepúlveda, Felipe Ignacio; Yáñez Prieto, Carolina.; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología.La creciente actividad industrial trae consigo un aumento de la contaminación ambiental que afecta tanto las aguas, el aire y los suelos. La minería del cobre es la principal actividad económica en Chile; también es causante de la contaminación de los suelos y afluentes por cobre y otros metales pesados. Existe un grupo de microorganismos del suelo denominados colectivamente como rizobios, capaces de establecer una relación simbiótica con plantas leguminosas como alfalfa, un cultivo de rotación altamente apreciado por su valor nutritivo como forraje y su aporte de nitrógeno fijado a los suelos. La presencia de cobre en altas concentraciones en los suelos podría tener efectos tóxicos sobre los rizobios, lo cual afecta tanto a los procesos bioquímicos como a la calidad del suelo. Para analizar los efectos de la alta concentración de cobre sobre la diversidad genética, tolerancia a cobre y presencia de determinantes genéticos de resistencia a cobre en simbiontes de alfalfa, se aislaron rizobios desde nódulos de Medicago sativa cultivada en suelos agrícolas cercanos a una fundición de cobre, como punto de comparación se aislaron rizobios desde M sativa alfalfa cultivada suelos libres de contaminación. Todos los rizobios aislados fueron identificados como Sinorhizobium meliloti, el principal simbionte de M sativa. La genotipificación reveló polimorfismos menores asociados a los aislados de sitios contaminados, la heterogeneidad de los aislados desde suelos no contaminados revela una mayor diversidad genética. Los aislados desde suelos contaminados se encuentran más adaptados a dicha condición y son capaces de tolerar concentraciones de cobre hasta 225 mg/I mientras que los aislados desde suelos limpios muestran sensibilidad a dicho metal. La presencia del determinante de resistencia a cobre copA fue posible encontrarla sólo en aislados desde suelos contaminados lo que se ve reflejado en el fenotipo de resistencia a cobre. Los nueve aislados que presentaron resistencia a cobre, representan potenciales inóculos para ser utilizados como biofertilizante asociados a M sativa, en suelos agrícolas que presentan problemas de cupricidad y en estrategias de remediación en suelos que han perdido su fertilidad producto de la presencia de cobre y otros metales pesados.Ítem El gen arcA que codifica para el factor transcripcional ArcA de Salmonella Typhimurium es requerido frente a las condiciones de estrés oxidativo encontradas en la infección de neutrófilos murinos(Universidad Andrés Bello, 2018) Aguirre Vásquez, Camila Nicole.; Saavedra, Claudia.; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Bioquímica.Los neutrófilos eliminan a patógenos sometiéndolos a distintos tipos de estrés, principalmente por la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Salmonella Typhimurium sobrevive a estas condiciones gracias a su capacidad de regulación génica, mediado por factores transcripcionales entre los cuales está ArcA, el cual cumple un rol importante en la resistencia bacteriana contra ROS, participa en la regulación del metabolismo celular, biosíntesis flagelar y motilidad. Resultados preliminares muestran que ArcA es requerido en la invasión de neutrófilos murinos y durante la infección sistémica en ratones. Sin embargo, se desconoce cuáles son los genes blancos modulados por éste, que le permitirían a Salmonella adaptarse y responder al estrés en el fagosoma del neutrófilo. Por lo que la hipótesis de este trabajo es "el gen arcA, que codifica para el factor transcripcional ArcA de Salmonella Typhimurium es requerido para la regulación de genes relacionados con la respuesta bacteriana a las condiciones de estrés oxidativo encontradas durante la infección de neutrófilos murinos". Se purificaron e infectaron neutrófilos, extraídos de médula ósea de ratón C57BL16 con las cepas Salmonella Typhimurium 14028s, AarcA y AarcA/pBR::arcA para determinar si el estrés oxidativo generado en el fagosoma del neutrófilo es afectado por la ausencia del gen arcA. Entonces, se evaluó la producción de ROS total, OZ , H2O2 y HOCI y encontramos que en AarcA la producción de ROS total disminuye significativamente. Sin embargo, no hubo cambios en la producción de las especies determinadas individualmente, lo cual sugiere que ArcA influiría en la activación del neutrófilo. Adicionalmente, se midió la concentración de NAD+ en Salmonella durante la infección de neutrófilos, solo se genera mayor concentración de este metabolito en la cepa DarcA en comparación a la cepa silvestre y complementada. Este resultado sugiere que las rutas de consumo de este cofactor se encuentran disminuidas en la mutante lo que generaría una acumulación de NAD+. También se realizó un análisis a nivel transcripcional para poder identificar los posibles blancos regulados por ArcA de genes involucrados en la respuesta a HOCl, virulencia y metabolismo durante la infección de neutrófilos murinos infectados con las cepas Salmonella Typhimurium 14028s AarcA y DarcA/pBR::arcA. Se evaluaron genes que codifican para: - Factores de virulencia, donde son inducidos aquellos relacionados con la formación y mantención de la VCS. - Enzimas destoxificantes y de reparación, de los cuales solo estaba inducido el gen katE y los genes msrA y trxB pertenecientes a sistemas de reparación de proteínas. - Porinas, donde la mayoría se encontraban inducidas y solo la expresión de dos genes estaban reprimidos: ompX y phoE. - Metabolismo central y de aminoácidos, en donde ArcA solamente interviene en la regulación de genes relacionados con e metabolismo de glutamato, lisina, alanina y cisteína. Por lo tanto, los resultados sugieren que la presencia del gen arcA es requerida para la regulación de genes, que en su conjunto permiten a la bacteria adaptarse y responder a las condiciones de estrés generadas en el fagosoma del neutrófilo.Ítem Aislamiento, selección y mutagénesis de hongos de ambientes fríos para el control de Botrytis cinerea en condición de postcosecha de uva de mesa(Universidad Andrés Bello, 2015) Jer Medina, Gamal Francisco; Polanco O., Rubén; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaNuestro país exporta una amplia variedad de productos alimenticios, siendo la fruta fresca uno de los principales productos exportados. En este contexto, la exportación de uva de mesa representa el 32% de la fruta exportada, lo cual posiciona a Chile como el productor líder de esta fruta a nivel mundial. Botrytis cinerea es un hongo fitopatógeno que infecta a más de 200 especies vegetales. En uva causa la pudrición gris, la cual genera importantes pérdidas económicas a nivel de postcosecha. Los métodos de control de este hongo se aplican a nivel de precosecha y se basan en la utilización de fungicidas químicos, mientras que en postcosecha el control se realiza principalmente mediante dióxido de azufre, el cual se libera sobre la uva durante su transporte en contenedores 0 °C. Sin embargo, se han reportado fenómenos adversos asociados a la utilización de SO2, como reacciones alérgicas en los consumidores, pardeamiento del raquis, `hairline', entre otros. Además, diversas normativas internacionales apuntan a la disminución de la utilización de compuestos químicos como fungicidas. Por esta razón, se requieren nuevos productos fungicidas biológicos capaces de controlar el crecimiento de B. cinerea a baja temperatura. En esta tesis se realizó el aislamiento y selección de hongos capaces de controlar el crecimiento de B. cinerea in vitro a baja temperatura. Luego, éstos fueron sometidos a mutagénesis química con el propósito de obtener un fenotipo que controlara de forma eficiente el crecimiento de Botrytis a baja temperatura. Se obtuvo una cepa mutante del hongo Bionectria ochroleuca capaz de controlar en un 45% el crecimiento del fitopatógeno. Por otra parte, el sobrenadante de la cepa mutagenizada crecida en glucosa, fue capaz de controla en un 60% el crecimiento de B. cinerea (cepas B05.10 y C19), a 4 °C tanto in vitro como en los sistemas vegetales zanahoria y uva de mesa (in vivo). Al estudiar el posible mecanismo por el cual esta cepa mutante ejerce el control sobre el crecimiento de B. cinerea, se encontró que éste se realiza mediante un metabolito difusible termoestable y no por la acción de metabolitos volátiles o acción enzimática.Ítem Modulación de la expresión de los ncmtRNAs por la proteína HBx-HBV(Universidad Andrés Bello, 2015) Jeldes Jerez, Emanuel; Villota Arcos, Claudio Enrique; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaEl carcinoma hepatocelular (CHC) es la tercera causa de muerte por cáncer a nivel mundial. La Infección crónica con Virus de la Hepatitis B (HBV) es el principal factor de riesgo para el desarrollo de CHC. Actualmente, se ha relacionado a la proteína X de HBV (HBx) en la patogénesis de CHC inducida por HBV. Sin embargo, el mecanismo molecular implicado en el desarrollo de CHC, aún es pobremente entendido. A pesar de la gran variedad de tratamientos anti-tumorales como antivirales existente, la alta tasa refractaria de estos han hecho que la búsqueda de una terapia contra el cáncer hepático, independiente del factor de riesgo, sea el mayor desafió actual. Nuestro grupo ha reportado la expresión diferencial de una familia de RNAs no codificantes de origen mitocondrial (ncmtRNA) entre células normales y tumorales. Células normales en proliferación expresan dos transcritos; sentido (SncmtRNA) y antisentido (ASncmtRNA). En contraste, células tumorales expresan el SncmtRNA, pero regulan negativamente la expresión de los antisentidos. Interferencia de los ASncmtRNAs en líneas derivadas de CHC, induce masiva muerte celular por apóptosis y una disminución del potencial tumorigénico, lo cual no se observa en células normales. Por otro lado, se observó que células tumorales así como el cultivo primario hepático murino que expresan la proteína HBx, desregulan la expresión de los ncmtRNAs más aún, se observa la expresión de un segundo transcrito sentido (SncmtRNA-2), al cual se ha asociado a procesos de inmortalización celular. Esto sugiere que el uso de ASOs dirigidos a los ASncmtRNAs puede ser una nueva herramienta terapéutica eficaz y selectiva contra el cáncer Hepático.Ítem Rol de la dinámica del retículo endoplásmico dendrítico en el transporte de la sub-unidad GABABRI del receptor metabotrópico de GABA(Universidad Andrés Bello, 2012) Jaureguiberry Bravo, Matías Beltran; Couve Correa, Andrés; Saavedra Sánchez, Claudia; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaLa morfología compleja y polarizada de las neuronas impone un desafío a procesos celulares básicos como el transporte de proteínas, dado que la mayoría de ellas se sintetizan en el soma neuronal y deben viajar cientos de micrómetros hacia sus lugares de destino en dendritas y/o axón. Recientemente, se ha encontrado que el retículo endoplásmico (RE) constituye una vía fundamental de transporte a lo largo de la neurona. En el soma neuronal, el RE es rugoso (RER) con estructuras de tipo sábana y ribosomas asociados a su membrana. En cambio en dendritas y axones el RE es liso (REL) y presentan una red formada principalmente por túbulos. Tanto el RER y REL forman una estructura continua y altamente dinámica. En el caso de la red tubular del REL, ésta se remodela continuamente formando, retrayendo o fusionando nuevos túbulos mediante mecanismos asociados al citoesqueleto de microtúbulos. Se desconoce cómo la dinámica del RE modifica las diversas funciones de este organelo, particularmente el transporte de proteínas de membrana como los receptores de neurotrasmisores. En esta tesis se estudió si la dinámica de la red tubular del RE, específicamente la elongación rápida de túbulos, aumenta el transporte de la subunidad GABABRI del receptor GABAB. Para ello, se utilizaron neuronas hipocampales en cultivo primario y astrocitos. Además se empleó tricostatina A (TSA), un compuesto que aumenta la acetilación de microtúbulos con un incremento de elongaciones tubulares. Se encontró que en ambos tipos celulares el TSA aumentó la acetilación de microtúbulos y el transporte de GABABR1. En astrocitos se observó que el TSA aumentó significativamente el número de túbulos cortos, a pesar de que no se detectaron cambios en la frecuencia de eventos de elongación rápida. Estos resultados sugieren que la hiperacetilación de microtúbulos modifica un mecanismo de transporte que opera en la membrana del RE, diferente a la elongación rápida de túbulos.Ítem Estudio genético de fenotipos de interés enológico en levaduras vínicas de Saccharomyces cerevisiae(Universidad Andrés Bello, 2013) Jara Urrea, Matías Alejandro; Martínez Fernández, Claudio; Polanco O., Rubén; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaSaccharomyces cerevisiae es la principal especie responsable de la fermentación alcohólica. En esta levadura los fenotipos de interés enológico como el consumo de nitrógeno son poligénicos y considerados rasgos cuantitativos o rasgos complejos. Con el objetivo de identificar regiones del genoma (QTLs) y genes asociados a fenotipos vinculados al consumo de nitrógeno, se realizó un análisis de ligamiento entre fenotipos y marcadores moleculares, a partir de un cruce entre cepas filogenéticamente divergentes que comparten una asociación a procesos fermentativos vínico y sake pero que, sin embargo, presentan diferentes características fenotípicas en fermentación. 96 segregantes provenientes de este cruce fueron sometidos a condiciones de fermentación en mosto sintético y, al día 6 de fermentación, fueron analizadas para el consumo de 20 fuentes de nitrógeno y nitrógeno asimilable por la levadura (YAN). El análisis de ligamiento entre fenotipo y genotipo permitió mapear 51 QTLs vinculados al consumo de estas fuentes de nitrógeno, determinándose que una media de 3 QTLs, así como los efectos aditivos y epistáticos entre ellos, explican las variaciones fenotípicas observadas para estos rasgos. Con el objetivo de validar los QTLs identificados, se realizó un análisis bioinformático que permitió determinar 40 genes candidatos para explicar las diferencias fenotípicas observadas, de los cuales 9 genes fueron analizados. Estos genes fueron estudiados mediante reciprocidad hemicigótica, mutando de forma heterocigota cada gen en la cepa híbrida. Este análisis permitió determinar que las variaciones alélicas en genes vinculados al sistema sensor de aminoácidos (PTR3), el sistema de fidelización del sistema sensor de aminoácidos (ASI), los reguladores de la represión catabólica del nitrógeno (GATI y GAT2), en permeasas de amplio espectro (AGPI y AGP3), además de genes vinculados al metabolismo central del nitrógeno (GLTI) y vinculados a la biosíntesis de metabolitos derivados de aminoácidos (SPE4), afectan el consumo de fuentes de nitrógeno. El análisis filogenético de estos genes permitió observar que estos alelos son característicos de cepas vínicas y de sake. Es más, el análisis de secuencia en ASh y GAT2, dos genes ligados en el cromosoma XIII que mostraron un alto nivel de pleiotropía antagonista y efectos epistáticos, permitió determinar una elevada tasa de polimorfismos sinónimos indicativo de selección balanceadora, sugiriendo que si esta es una característica común en la levadura los polimorfismos no-neutrales epistáticos pueden ser un contribuyente importante para la variación genética de rasgos complejos.Ítem Participación del factor transcripcional ArcA en la virulencia de Salmonella enterica serovar Typhimurium(Universidad Andrés Bello, 2015) Inostroza Mora, Ana Carolina; Saavedra Sánchez, Claudia; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaVarios factores involucrados en los procesos infectivos han sido identificados a través de estudios de interacción patógeno-hospedero. Salmonella enterica serovar Typhimurium, agente causante de gastroenteritis en humanos e infección sistémica en ratones, posee sistemas de defensa que le permiten sobrellevar tanto la respuesta inmune como la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) por parte del hospedero. Uno de los mecanismos por los cuales Salmonella modula la respuesta a ROS está mediado por el factor transcripcional ArcA. En nuestro laboratorio, la proteína ArcA fue caracterizada bioquímica y funcionalmente en condiciones de crecimiento aeróbico, observando que la respuesta a estrés oxidativo generado por peróxido de hidrógeno (H2O2) está modulada por la expresión de genes claves identificados en esta condición. Sin embargo, estos genes no han sido caracterizados en términos de infección de macrófagos murinos, y no ha sido caracterizado como un' factor de virulencia. En este contexto, nos propusimos demostrar que la expresión de estos genes es modulada por el regulador global ArcA durante la infección de macrófagos murinos y que ArcA es un factor de virulencia requerido para un ciclo infectivo en macrofagos. Para responder esta hipótesis, realizamos ensayos de supervivencia con cepas mutantes AarcA en macrófagos murinos RAW 264.7, medimos por qRT-PCR la expresión de genes previamente descritos que son regulados por AreA en respuesta a ROS usando bacterias recuperadas desde macrófagos infectados, y se realizaron ensayos de infección en el modelo murino (BALB/c). Nuestros resultados muestran una disminución del 50% de la invasión al macrófago en la cepa carente del factor transcripcional AreA, comparado con la cepa silvestre de S. Typhimurium, y además la falta de este factor promueve una notable disminución en su viabilidad en el modelo murino. Además varios genes regulados por ArcA en la infección de macrófagos fueron identificados, por ejemplo el gen ompW codificante de una proteína de membrana externa, el cual está negativamente regulado por ArcA a lo largo de todos los estadíos de infección. Estos resultados se correlacionan con trabajos que demostraron que dicho gen es requerido como mecanismo para la defensa de ROS y también concuerdan con el patrón de expresión que presentó en respuesta a H2O2. Por lo tanto, durante este trabajo de tesis se logró demostrar que el factor transcripcional ArcA participa en la regulación de la expresión génica durante la infección de macrófagos murinos, siendo las condiciones de estrés oxidativo presentes al interior del macrófago las que gatillarían la activación del factor transcripcional AreA para su consecuente acción. Además fuimos capaces de demostrar en estudios de infección de macrófagos murinos que el factor transcripcional ArcA por sí solo es requerido para el proceso de invasión celular. Y finalmente demostramos, a partir de infección del modelo murino, que la proteína ArcA es un factor de virulencia.Ítem Desarrollo, caracterización y evaluación biológica de nanopartículas poliméricas en el tratamiento del dolor crónico(Universidad Andrés Bello, 2014) Ibarra Durán, Paula Soledad; Constandil Córdova, LuisEl dolor crónico es considerado un urgente problema de salud pública, debido al porcentaje de la población a nivel mundial que lo padece y los costos asociados que tiene esta patología. La activación de las células gliales, como astrocitos y microglia, juegan un rol fundamental en el desarrollo y mantención de los dolores crónicos. La activación de las células de la glía involucran un incremento en el número de células y la secreción de múltiples moléculas neuroactivas como citoquinas, neurotransmisores y quimioquinas entre otras, lo cual genera un incremento en la eficiencia sináptica y por consecuencia hipersensibilidad. Existen numerosas opciones de tratamientos disponibles para el alivio del dolor crónico, como AINES, derivados de la morfina y antidepresivos. Sin embargo, estos fármacos alivian o reducen el dolor solo en un 70% de los pacientes. Una de las características de los dolores crónicos es su persistencia en el tiempo, esto implica que las terapias también deben ser prolongadas, lo cual no siempre es factible de implementar, sobre todo en tratamientos inyectables. Con la finalidad de desarrollar nuevas estrategias terapéuticas para aliviar los cuadros de dolor crónico, en esta tesis proponemos desarrollar nanopartículas cargadas con pentoxifilina (PTX) que tengan actividad antinociceptiva prolongada con una administración única y que no presenten efectos adversos. Las NPs cargadas con PTX se sintetizaron utilizando el polímero PLGA, mediante una modificación del método de doble emulsión-evaporación del solvente. La caracterización fisicoquímica de las NPs-PTX mostró que son de forma redondeada, superficie lisa y de tamaño homogéneo, en promedio 277,6 ± 23,3 nm. La carga superficial fue -18,3 ± 3,1 mV y el porcentaje de encapsulamiento fue de 50,45 ± 2,01% Estos valores se encuentran dentro de los parámetros de otras nanopartículas poliméricas reportadas en la literatura. La actividad antinociceptiva se estudió en tres modelos de dolor crónico, monoartrítico (Ma), neuropático (Np) y de estimulación eléctrica de alta frecuencia (estimulación ESAF). En el modelo Ma una inyección de NPs-PTX i.t. revirtió parcialmente el cuadro de hipersensibilidad que presentaban las ratas. En los modelos Np y de estimulación ESAF una inyección de NPs-PTX i.t. produjo la reversión completa de la hipersensibilidad que presentaban las ratas. Este efecto se mantuvo por 14días, hasta el final del estudio. También se mostró que una inyección de NPs-PTX i.t., es capaz de prevenir la hipersensibilidad que se genera cuando se inducen los modelos Np y estimulación ESAF. En conjunto estos datos muestran que las NPs-PTX son efectivas en el alivio de cuadros de dolor crónico en animales de investigación. Desde el punto de vista de los efectos adversos, una inyección de NPs-PTX i.t. a ratas no produjo cambios en su conducta, aspecto general externo, alteraciones en el hemograma, modificaciones en los perfiles bioquímicos, ni indujo apoptosis a nivel espinal. Es decir, las dosis utilizadas en este estudio no presentaron efectos secundarios metabólicos ni histológicos observables. Tomando todos los antecedentes recién presentados, las NPs-PTX desarrolladas y evaluadas en el transcurso de esta tesis, constituyen una atractiva posibilidad de convertirse en una nueva y prometedora terapia para el tratamiento de cuadros de dolor crónico en humanos.Ítem Selección y caracterización de levaduras ambientales para el control de Botrytis cinerea en uva de mesa(Universidad Andrés Bello, 2017) Huck Briceño, Jenifer Andrea; Polanco O., Rubén; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de BioquímicaBotrytis cinerea es un hongo fitopatógeno necrotrófico, responsable de una enfermedad denominada pudrición gris, que causa pérdidas en más de 1400 especies de cultivos en todo el mundo. En Chile, B. cinerea es el principal problema de índole fitopatológico que afecta a la uva de mesa de exportación, causando pérdidas económicas importantes a nivel de postcosecha. Los métodos de control incluyen prácticas culturales, productos químicos y control biológico. Los métodos químicos utilizan fungicidas químicos para controlar la infección, sin embargo, su uso prolongado causa la aparición de cepas resistentes y efectos secundarios que afectan tanto a la salud de la población como al medio ambiente. Una alternativa al uso de fungicidas químicos son los agentes de control biológico. El objetivo de esta Tesis, fue caracterizar levaduras ambientales con acción biocontroladora sobre B. cinerea en uva de mesa y evaluar el posible mecanismo de acción. De un total de 19 aislados de levaduras ambientales, tres (858A, UCT138 y 1351A) fueron seleccionados por su capacidad para crecer a baja temperatura (4°C) e inhibir el crecimiento de B. cinerea (cepa C-19) en uva de mesa. Estos aislados se identificaron por secuenciación de la región ITS y correspondieron a Candida railenensis (858AB, UCT138B y 1351A) y Rhodotorula mucilaginosa (858AR, UCT138R). Adicionalmente, se determinó que su capacidad para inhibir el crecimiento de B. cinerea estaba mediada, principalmente, por la producción de compuestos orgánicos volátiles. Los compuestos más abundantes producidos por C. railenensis y R. mucilagenosa fueron 3-metil-2-butanol y 2-metil-l-butanol, mientras que, en menor abundancia se produjo feniletil alcohol. Por otra parte, los compuestos, 3- metil-butanal y etil 2 propenil éster, sólo fueron detectados en R. mucilagenosa. Los aislados caracterizados en esta Tesis son capaces de crecer a baja temperatura, controlar tanto in vitro como in vivo el crecimiento de B. cinerea mediante la producción de compuestos orgánicos volátiles, por lo tanto tienen un interesante potencial como agentes de control biológico, para reducir la pudrición gris causada por B. cinerea en condiciones de postcosecha de uva de mesa.Ítem Caracterización de una celobiohidrolasa en Botrytis cinerea(Universidad Andrés Bello, 2016) Hormazabal Castillo, Juan Patricio; Silva Moreno, Evelyn; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaEn los últimos años, la industria hortofiutícola chilena ha tenido un aumento significativo en los volúmenes de producción y exportación, presentándose como un mercado sumamente rentable a nivel internacional. El incremento en los niveles de exportación radica en la mejora de la calidad en general de los productos. Existen diversos patógenos fúngicos, bacterianos y virales que constituyen una amenaza para la productividad y calidad de la fruta. Entre los patógenos más agresivos se encuentra el hongo Botrytis cinerea, que causa la enfermedad llamada "pudrición gris", la cual está situada como uno de los mayores problemas fitosanitarios en los cultivos de nuestro país. Tradicionalmente, el control se ha basado en el uso de fungicidas de origen químico. Sin embargo, se ha descrito que éstos presentan impactos negativos para el medioambiente y su uso reiterado da origen a la aparición de cepas resistentes. A pesar de que las etapas del ciclo infectivo están bien identificadas, se desconocen los mecanismos moleculares blancos y/o regulatorios que comandan la etapa de germinación. Es por esto, que la aproximación de identificar y caracterizar aquellos genes involucrados en virulencia, específicamente en las etapas tempranos de la infección, son claves para impedir el éxito de la infección. En estudios previos realizados en nuestro laboratorio, mediante análisis de expresión génica en etapas tempranas de infección, entre los genes sobre-expresados en germinación se identificó a una putativa celobiohidrolasa denominada Bcch1, enzima perteneciente al grupo de CAZymes, lo cual sugiere un posible rol importante en la salida de dormancia de la espora durante la germinación. En base a lo anterior, se hace relevante estudiar la función de este gen en la virulencia y/o patogenicidad de Botrytis. Por lo tanto, en este estudio de identificó, aisló, caracterizó y se realizaron estudios funcionales del gen Bcchl, que codifica para una celobiohidrolasa.Ítem Caracterización de los componentes de la pared celular de uva de mesa "Thompson Seedless" en estadios tempranos de desarrollo y su relación con la firmeza en cosecha y postcosecha(Universidad Andrés Bello, 2019) Gutiérrez Ferreira, Carlos Germán; Campos Vargas, Reinaldo; Facultad de Ciencias de la Vida; Escuela de Ingeniería en BiotecnologíaVitis vinifera es una de las especies de plantas frutales más importantes en el mundo. La uva de mesa es la fruta fresca más exportada en Chile, siendo la variedad Thompson Seedless una de las más relevantes dentro de los múltiples cultivares producidos en nuestro país. La exportación de este producto a los mercados extranjeros conlleva grandes desafíos debido a las distancias y por consecuencia, al tiempo de transporte involucrado, el cual afecta directamente su calidad debido a los distintos procesos metabólicos que permanecen activos, aún incluso durante su almacenamiento en frío. Uno de los atributos más afectado corresponde a la firmeza de la baya, el cual es uno de los parámetros más apreciados por el consumidor, no obstante, la variedad Thompson Seedless presenta problemas para mantener estas características durante postcosecha. Esta disminución en la firmeza se ha asociado al desensamble de la pared celular en diversos tipos de berries, sin embargo, los antecedentes disponibles no consideran las modificaciones que presenta esta estructura durante los puntos previos a pinta. En el presente estudio se sugiere que los distintos componentes de la pared celular se encuentran asociados a la firmeza del fruto y deben ser analizados en su conjunto debido a las grandes variaciones fenotípicas y moleculares que presenta la uva de mesa durante todo su desarrollo. Nuestros resultados sugieren que la disminución de textura en las bayas se encuentra directamente asociada al aumento del epítopo disponible, correspondiente a las ramificaciones del ramnogalacturonano I y a la configuración XXXG presente en las cadenas de hemicelulosa, observado mediante un análisis inmunologico in muro. Los análisis enzimáticos en la totalidad del fruto muestran una elevada actividad de las enzimas (3-Galactosidasa y Poligalacturonasa encargadas del remodelamiento de la pared, principalmente en los estadios tempranos del desarrollo; observando una correlación entre esta actividad y la expresión de los genes correspondientes a estas enzimas durante las primeras semanas post-antesis del fruto. Nuestros resultados sugieren que el ablandamiento se debe a la degradación de los distintos componentes de la pared celular, donde el aumento de pectinas y hemicelulosas en las fases solubles del fraccionamiento de la pared presenta la mayor correlación con el parámetro de firmeza durante la cosecha del fruto.