Efecto de la modificación de los residuos C45A, H45A, H322Y y E354K del componente E3 del complejo PDH de Aeroromonas caviae ST en el estrés oxidativo generado por telurito de potasio
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Fecha
2010
Autores
Profesor/a Guía
Facultad/escuela
Idioma
es
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Editor
Universidad Andrés Bello
Nombre de Curso
Licencia CC
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Resumen
Una de las características más relevantes del telurito de potasio
(K2Te03) es es su gran toxicidad para la mayoría de los microorganismos. La cepa
ambiental de Aeromonas cavíae ST es resistente a elevadas concentraciones
de K2 Te03 y reduce telurito a teluro elemental
acoplado a la oxidación de NADH (actividad telurito reductasa), actividad que
recae en el componente E3 (dihidrolipoamida deshidrogenasa) del complejo
multienzimático piruvato deshidrogenasa (PDH).
Se clonó el gen lpdA de A. cavíae conteniendo las mutaciones C45A,
H322Y o E354K en Escheríchía colí 11/pd. Ensayos de concentración mínima
inhibitoria de crecimiento (MICs), determinación de áreas de inhibición del
crecimiento (cm2) y curvas de crecimiento en presencia de K2Te03 mostraron
que las cepas que expresan los genes mutados en estudio son más sensibles
al tóxico en relación a la cepa complementada con el gen silvestre. Los
ensayos de la actividad inherente a E3 -dihidrolipoamida deshidrogenasa
(ADD)- y PDH, mostraron que el gen /pdA de A. caviae es funcional en E. colí.
Extractos proteicos conteniendo LpdAs con las mutaciones C45A, H322Y y
E354K mostraron cambios -30, 80 y 50% en la actividad ADD que aquellos
provenientes de células que expresan el gen silvestre. Por otro lado, la
actividad PDH disminuyó sólo en el caso de LpdA con las modificaciones
H322Y o E354K. Ambas actividades, PDH y ADD, se vieron disminuidas
cuando las cepas fueron expuestas a K2Te03. Por su parte, la actividad telurito
reductasa mostró una disminución de -60% en los mismos extractos, lo que se
correlacionó con determinaciones in vitro utilizando las LpdAs purificadas.
Ensayos de citometría de flujo utilizando las sondas diclorodihidrofluoresceína
diacetato (H2DCFDA) y dihidroetidina (DHE) mostraron que las cepas con las
modificaciones en el gen lpdA presentan niveles de estrés oxidativo
aumentados luego de la exposición a telurito que la cepa conteniendo el gen
LpdA silvestre.
En síntesis, los resultados de esta Tesis sugieren que los residuos C45,
H322 y E354 del componente E3 del complejo PDH de A. caviae ST estarían
involucrados en la actividad telurito reductasa y en la respuesta al estrés
oxidativo generado por la exposición a K2 Te03.
Notas
Tesis (Bioquímico, Magíster en Bioquímica)
Palabras clave
Genética Bacteriana