Internalización de proteínas efectoras SipB y SipC mediante vesículas de membrana externa de Salmonella Typhi en células epiteliales

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dc.contributor.advisorFuentes Aravena, Juan
dc.contributor.authorJiménez Meneses, Carol Elizabeth
dc.contributor.editorFacultad de Ciencias de la Vida
dc.date.accessioned2024-10-07T18:07:53Z
dc.date.available2024-10-07T18:07:53Z
dc.date.issued2023
dc.descriptionTesis (Licenciado en Biología)
dc.descriptionProyectos del laboratorio FONDECYT 1220584 y FONDECYT 1181638.
dc.description.abstractSalmonella entérica serovar Typhi (S. Typhi) es el causante etiológico de la fiebre tifoidea, teniendo como hospedero único al ser humano. Dentro de los mecanismos que utiliza Salmonella para infectar y entregar factores de virulencia se encuentra el sistema de secreción tipo 3 (T3SS), el que se une a la célula hospedera mediante la acción de las proteínas SipB y SipC. Estas proteínas conforman el translocón (poro), que se sitúa en la membrana de la célula hospedera, permitiendo una conexión directa entre el citoplasma bacteriano y la célula diana. Por su parte, las vesículas de membrana externa (OMVs), son proteoliposomas nanométricos que se desprenden naturalmente de las bacterias, desempeñando diversas funciones. Pese a que, en los últimos años, estas vesículas han ido ganando atención, la funcionalidad de las OMVs de S. Typhi es desconocida. Estudios de proteómica realizados en nuestro laboratorio indican que SipB y SipC se encuentran presentes en OMVs de S. Typhi. Además, observamos que las OMVs de S. Typhi son internalizadas por células epiteliales. En base a lo ya descrito y con la finalidad de comprender más a detalle si las OMVs de S. Typhi realizan la entrega de proteínas, proponemos como hipótesis, las proteínas del translocón SipB y SipC pueden ser entregadas a células epiteliales mediante OMVs de Salmonella Typhi. Utilizando la técnica de Gibson Assembly se fusionaron las proteínas SipB y SipC con el reportero TEM-1 (β-Lactamasa) en un vector y se insertaron en una cepa silvestre (WT) de S. Typhi. Para dilucidar la entrega de sipB-TEM y sipCTEM se utilizó el ensayo de FRET utilizando como reportero la β-lactamasa. Se observó que las células con sipB-TEM y sipC-TEM presentan fluorescencia asociada a translocación a las células epiteliales por lo que es plausible decir que las OMVs de S. Typhi actúan como vehículos de entrega de efectores del T3SS1 asociados al translocón. A futuro las metodologías aplicadas en este trabajo pueden extrapolarse al estudio de otros factores de virulencia y comprender cuales de estos poseen la capacidad de ser entregados mediante OMVs.
dc.description.abstractSalmonella enterica serovar Typhi (S. Typhi) is the etiological cause of typhoid fever, with humans as its sole host. Among the mechanisms that Salmonella uses to infect and deliver virulence factors is the type 3 secretion system (T3SS), which binds to the host cell through the action of the SipB and SipC proteins. These proteins make up the translocon (pore), which is located in the membrane of the host cell, allowing a direct connection between the bacterial cytoplasm and the target cell. For their part, outer membrane vesicles (OMVs) are nanometric proteoliposomes that are naturally released from bacteria, performing various functions. Although these vesicles have been gaining attention in recent years, the functionality of S. Typhi OMVs is unknown. Proteomics studies carried out in our laboratory indicate that SipB and SipC are present in S. Typhi OMVs. Furthermore, we observed that S. Typhi OMVs are internalized by epithelial cells. Based on what has already been described and in order to understand in more detail whether S. Typhi OMVs deliver proteins, we propose as a hypothesis that the SipB and SipC translocon proteins can be delivered to epithelial cells by Salmonella Typhi OMVs. Using the Gibson Assembly technique, the SipB and SipC proteins were fused with the TEM-1 (β-lactamase) reporter in a vector and inserted into a wild-type (WT) S. Typhi strain. To elucidate the delivery of sipB-TEM and sipC-TEM, the FRET assay was used using β-lactamase as a reporter. It was observed that cells with sipB-TEM and sipC-TEM present fluorescence associated with translocation to epithelial cells, so it is plausible to say that S. Typhi OMVs act as delivery vehicles for T3SS-1 effectors associated with the translocon. In the future, the methodologies applied in this work can be extrapolated to the study of other virulence factors and understand which of these have the capacity to be delivered through OMVs.
dc.identifier.urihttps://repositorio.unab.cl/handle/ria/61121
dc.language.isoes
dc.publisherUniversidad Andrés Bello
dc.subjectProteínas
dc.subjectSalmonella Typhi
dc.subjectCélulas Epiteliales
dc.subjectMembrana Celular
dc.titleInternalización de proteínas efectoras SipB y SipC mediante vesículas de membrana externa de Salmonella Typhi en células epiteliales
dc.typeTesis
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