Ingeniería metabólica en pseudomonas putida KT2440 para aumentar la producción de polihidroxialcanoatos en glicerol

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dc.contributor.advisorPoblete Castro, Ignacio
dc.contributor.authorDuchens Sazo, Daniela Fernanda
dc.date.accessioned2021-07-15T21:24:53Z
dc.date.available2021-07-15T21:24:53Z
dc.date.issued2019
dc.descriptionTesis (Magíster en Biotecnología y Ciencias de la Vida)es
dc.description.abstractLos microorganismos ambientales son capaces de sintetizar de manera natural biopolímeros, denominados polihidroxialcanoatos (PHAs), los cuales se acumulan en forma de vesículas en el citoplasma de las células a modo de reserva de carbono y energía. Dicha acumulación ocurre bajo condiciones específicas de desbalance nutricional y ausencia de micronutrientes. Los PHAs tienen el potencial de reemplazar a los plásticos convencionales, ya que poseen propiedades físicas y mecánicas similares a las que presentan los termoplásticos como el tereftalato de polietileno (PET) y polietileno (PE). La bacteria Pseudomonas putida KT2440 es capaz de usar glicerol como fuente de carbono, un subproducto obtenido de la industria del biodiesel, para sintetizar dichos biopolímeros, alcanzando un rendimiento del 30% en relación con su biomasa total. Utilizando el modelo matemático descrito para P. putida KT2440 se establecieron genes blancos específicos para optimizar la producción de PHAs de cadena media (mcl-PHAs), donde la formación de metabolitos intermediarios de la ruta de los ácidos tricarboxílicos (TCA) como el malato y succinato fueron eliminados, para así redireccionar el flujo de carbono y privilegiar la síntesis de PHAs. En el siguiente estudio se obtuvo una cepa knockout para los genes ppc y aceA, que codifican para las enzimas fosfoenolpiruvato carboxilasa e isocitrato liasa, respectivamente. Los resultados obtenidos demuestran que la cepa doble mutante P. putida KT2440 Δppc-aceA es deficiente en la síntesis de PHA en comparación a la cepa parental. La producción de PHA y biomasa total es de 22,1% y 3,1 (g/L), respectivamente, cuando fue cultivada en medio mínimo (M9) con glicerol (30 g/L) como única fuente de carbono. Estos resultados sugieren que ambas enzimas catalizan reacciones que no son determinantes en el flujo de carbono relacionado con la producción de PHA y que existen otras reacciones que estarían supliendo este flujo hacia el ciclo del TCA, como la catalizada por la enzima piruvato carboxilasa. Considerando todos los resultados obtenidos, podríamos proponer un tipo de regulación específica de P. putida para controlar el flujo de carbono a nivel del nodo del piruvato, en donde las reacciones anapleróticas juegan un rol esencial, regulaciones que aún no comprendemos del todo, y se hace imperativo dilucidar para poder optimizar el rendimiento de PHA en futuras cepas generadas en nuestro laboratorio.es
dc.identifier.urihttp://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/19413
dc.language.isoeses
dc.publisherUniversidad Andrés Belloes
dc.subjectPseudomonases
dc.subjectIngeniería Metabólicaes
dc.subjectPolihidroxialcanoatoses
dc.titleIngeniería metabólica en pseudomonas putida KT2440 para aumentar la producción de polihidroxialcanoatos en gliceroles
dc.typeTesises
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