Determinación de la modulación de hormona gonadotrofina coriónica humana (hCG) sobre la vía de señalización del factor de crecimiento transformante ß (TGF-ß) en células de estroma endometrial humano (ESC)

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dc.contributor.advisorTapia Pizarro, Alejandro
dc.contributor.authorZavaleta Acosta, Keyla Noemí
dc.contributor.editorFacultad de Ciencias Biológicas
dc.contributor.editorEscuela de Ingeniería en Biotecnología
dc.date.accessioned2017-10-30T22:58:41Z
dc.date.available2017-10-30T22:58:41Z
dc.date.issued2017
dc.descriptionTesis (Magíster en Biotecnología)es_CL
dc.description.abstractLa implantación embrionaria e invasión del trofoblasto en el estroma endometrial son esenciales para el establecimiento de un embarazo exitoso. Estos procesos son regulados por la señalización recíproca entre moléculas provenientes de la madre y del embrión. TGF-β es una citoquina que se expresa en el endometrio humano, sin embargo sus efectos en este tejido inhiben la invasión del trofoblasto in vitro. Por otro lado, la hCG secretada por el embrión tiene un efecto regulatorio opuesto en el endometrio, facilitando la invasión. La hipótesis de trabajo es que la señalización de hCG regula negativamente la señalización de TGF-β en células de estroma endometrial humano (ESC). El objetivo de esta tesis fue determinar las vías de señalización activadas por TGF-β y su posible modulación por hCG en ESC humano. Se evaluó por inmunoblot la activación de las vías de señalización mediadas por ERK 1/2, AKT 1/2/3 y SMAD 2/3 en la línea celular derivada de ESC, St-T1b y en cultivo primario de ESC. La estimulación de los cultivos con dosis crecientes de TGF-β1 (1 - 10 ng/mL) o con hCG (10 UI/mL) indujo la fosforilación de ERK 1/2, mientras que disminuyó la de AKT 1/2/3. Además, la fosforilación de SMAD 2/3 sólo se indujo en los cultivos estimulados con la citoquina. La presencia de hCG en los cultivos estimulados con TGF-β no modificó significativamente la fosforilación de ERK y AKT. Sin embargo, la activación de SMAD 2/3 inducida por TGF-β se bloqueó completamente en presencia de hCG. Este resultado fue confirmado mediante inmunofluorescencia en ESC estimuladas con TGF-β (10 ng/mL) y/o hCG. Además se determinó mediante qPCR que el aumento en ~50% en el nivel de transcrito para SMAD 7 inducido por TGF-β (10 ng/mL) en ESC, también es suprimido al co-estimular con hCG. La viabilidad celular evaluada mediante ensayo MTS, no se modificó con ninguno de los tratamientos utilizados tanto en la línea celular, como en el cultivo primario de ESC. Estos resultados revelan por primera vez un efecto modulador de hCG sobre la señalización de TGF-β en ESC, lo cual podría tener implicancias directas en el proceso de implantación y placentación embrionaria. La comprensión de estos mecanismos de regulación podrían contribuir a resolver los actuales problemas de la medicina reproductiva, permitiendo el desarrollo de nuevos blancos terapéuticos.es_CL
dc.description.abstractEmbryo implantation and trophoblast invasion throughout the endometrial stroma are essential for the establishment of a successful pregnancy. These processes are regulated by the reciprocal signaling between molecules from maternal and embryonic origin. TGF-β is a cytokine expressed by the human endometrium, however its effects on this tissue inhibit trophoblast invasion in vitro. On the other hand, hCG secreted by the embryo, has an opposite regulatory effect on the endometrium, facilitating trophoblast invasion. The working hypothesis is that hCG signaling negatively regulates TGF-β signaling in human endometrial stromal cells (ESC). The aim of this thesis was to determine the signaling phatway activated by TGF-β in ESC and its possible modulation by hCG. Activation of signaling pathways mediated by ERK 1/2, AKT 1/2/3 and SMAD 2/3 were evaluated by immunoblot in the ESC-derived cell line St-T1b and primary human ESC cultures. Stimulation with increasing doses of TGF-β (1 - 10 ng/mL) or hCG (10UI/mL) induced ERK 1/2 phosphorylation while decreased AKT 1/2/3. In addition, SMAD 2/3 phosphorylation was only induced in cultures stimulated with the cytokine. The presence of hCG in the TGF-β-stimulated cultures did not significantly modify ERK and AKT phosphorylation. However SMAD 2/3 activation induced by TGF-β was completely blocked in the presence of hCG. This result was confirmed by immunofluorescence in ESC stimulated with TGF-β (10 ng/mL) and/or hCG. Furthermore, the ~50% increase in transcript level for SMAD 7 induced by TGF-β (10 ng/mL), determined by qPCR in ESC, was also suppressed upon co-stimulation with hCG. Cell viability evaluated with the MTS assay, did not change with either treatment used in both the cell line and the primary ESC cultures. These results describe for the first time a modulating effect of hCG on TGF-β signaling in ESC, which may have direct implications in the process of embryo implantation and placentation. Understanding these regulatory mechanisms may contribute to solve current problems in reproductive medicine and the development of potencial new therapeutic targets.
dc.identifier.urihttp://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/4507
dc.language.isoeses_CL
dc.publisherUniversidad Andrés Belloes_CL
dc.subjectEmbarazoes_CL
dc.subjectImplantación Embrionariaes_CL
dc.subjectReceptividad Endometriales_CL
dc.titleDeterminación de la modulación de hormona gonadotrofina coriónica humana (hCG) sobre la vía de señalización del factor de crecimiento transformante ß (TGF-ß) en células de estroma endometrial humano (ESC)es_CL
dc.typeTesises_CL
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