Localización y caracterización de proteínas en esporas de Clostridium difficile
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Fecha
2014
Autores
Profesor/a Guía
Facultad/escuela
Idioma
es
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Editor
Universidad Andrés Bello
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Licencia CC
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Resumen
Clostridium dtfflcile es un importante patógeno nosocomial que ha llegado a ser la mayor
causa de diarrea asociada a antibióticos. Las esporas de C dfflcile son esenciales para la
patogénesis, infección y persistencia de esta enfermedad. El exosporium es la capa más
externa de las esporas de C. djfflcile, y juega un rol en la interacción temprana entre la
espora y el hospedero como lo es la adherencia a células epiteliales del intestino. Se ha
identificado una proteína rica en cisteinas (CdeC), la cual es un factor morfogenético del
exosporium requerida para su correcto ensamblaje. En este estudio, usando fusiones
traduccionales en proteínas del exosporium, hemos demostrado que las proteínas del
exosporium BelAl, BclA2, BclA3, CdeA, CdeB, CdeM y el factor morfogenético CdeC
están únicamente localizadas en el exosporium de esporas de C. dfficile.
Sorprendentemente, cerca del 20% y 30% de los niveles totales de las proteínas
previamente descritas en la superficie de las esporas (CotA y CotB respectivamente), están
localizadas en el exospouuuu y la mayoría está localizada en la cubierta. CdeC está
involucrado en la formación del complejo de alto peso molecular (> 110 kDa) de BclAl y
BclA3, y también en el complejo de bajo peso molecular (<20 kDa) de CdeA. En la
ausencia de CdeC, las proteínas BclAs están presenten como especies de 48,3 kDa. Este
factor también juega un rol en la localización en el exosporium de la proteína CotB, pero
no de COLA y CdeB. Sorpresivamente, en ausencia de CdeC, se observó mayor cantidad de
proteínas CdeA, CdeM, BclAl y Bc1A2 en las esporas de C. dfficile. Conjuntamente, este
trabajo proporciona una primera aproximación del mecanismo asociado al ensamblaje del
exosporium de esporas de C. djfficile.
Clostridium docile is an important nosocomial pathogen that has become a major cause of antibiotic-associated diarrhea. C. docile spores are essential for C. difficile pathogenesis, infection and persistence of the disease. The exosporium is the outermost layer of C. docile spores plays roles in early host-spore interactions such as spore adherence to intestinal epithelium cells. We have identified a cysteine rich exosporium morphogenetic factor required for correct exosporium assembly. In this study, by using translational fusions of exosporium proteins, we first demonstrate that the exosporium proteins Bc1A1, Bc1A2, BclA3, CdeA and CdeB and the exosporium morphogenetic factors CdeC and CdeM are uniquely localised, in the exosporium layer of C. docile spores. Strikingly, nearly 20 and 30% of total levels of previously described spore surface proteins CotA and CotB, respectively, were localized in the exosporium layer and the majority was coat-located. CdeC is involved in formation of high molecular mass complex (>120 kDa) of BclAl and BclA3, also is involved in formation of low molecular mass complex (<20 kDa) In absence of CdeC, Bc1As proteins are present as 48,3 kDa species. CdeC also plays a role exosporium localization of CotB, but not CotA and CdeB. Surprisingly, increased amount is observed for CdeA, CdeM, BclAI and BclA2 in absence of CdeC. Collectively, this work provides for the first approach of the mechanisms associated in the assembly of the exosporium layer of C. docile spores.
Clostridium docile is an important nosocomial pathogen that has become a major cause of antibiotic-associated diarrhea. C. docile spores are essential for C. difficile pathogenesis, infection and persistence of the disease. The exosporium is the outermost layer of C. docile spores plays roles in early host-spore interactions such as spore adherence to intestinal epithelium cells. We have identified a cysteine rich exosporium morphogenetic factor required for correct exosporium assembly. In this study, by using translational fusions of exosporium proteins, we first demonstrate that the exosporium proteins Bc1A1, Bc1A2, BclA3, CdeA and CdeB and the exosporium morphogenetic factors CdeC and CdeM are uniquely localised, in the exosporium layer of C. docile spores. Strikingly, nearly 20 and 30% of total levels of previously described spore surface proteins CotA and CotB, respectively, were localized in the exosporium layer and the majority was coat-located. CdeC is involved in formation of high molecular mass complex (>120 kDa) of BclAl and BclA3, also is involved in formation of low molecular mass complex (<20 kDa) In absence of CdeC, Bc1As proteins are present as 48,3 kDa species. CdeC also plays a role exosporium localization of CotB, but not CotA and CdeB. Surprisingly, increased amount is observed for CdeA, CdeM, BclAI and BclA2 in absence of CdeC. Collectively, this work provides for the first approach of the mechanisms associated in the assembly of the exosporium layer of C. docile spores.
Notas
Tesis (Bioquímico, Magíster en Bioquímica)
Esta Tesis se realizó en el Laboratorio Gut Microbiota and Gastrointestinal Pathologies Research Group de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Andrés Bello y fue financiada por el proyecto FONDECYT N°1110569 "Adherence of C. docile spores to the intestinal mucosa".
Esta Tesis se realizó en el Laboratorio Gut Microbiota and Gastrointestinal Pathologies Research Group de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Andrés Bello y fue financiada por el proyecto FONDECYT N°1110569 "Adherence of C. docile spores to the intestinal mucosa".
Agradecimientos
Folio/s de proyecto/s
Palabras clave
Esporas, Proteínas, Clostridium Difficile