Aislamiento de bacterias del género pseudomonas desde árboles de cerezo (Prunus Avium) afectados con cáncer

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dc.contributor.advisorBittner Ortega, Mauricio
dc.contributor.authorLópez Córdova, Jocelyn Cecilia
dc.contributor.editorFacultad de Ciencias de la Vida
dc.date.accessioned2019-10-02T14:41:18Z
dc.date.available2019-10-02T14:41:18Z
dc.date.issued2018
dc.descriptionTesis (Ingeniero en Biotecnología)es
dc.description.abstractChile es el principal país productor y exportador de cerezas del hemisferio sur. Sin embargo, la integridad del árbol y conservación de la calidad de frutos se encuentran amenazados por infecciones de patógenos. El principal problema fitosanitario en cerezo (Prunus avium) es el cáncer bacteriano debido a su severidad y difícil control, siendo Pseudomonas syringae pv. syringae (Pss) el agente causal en Chile. Un segundo patovar, Pseudomonas syringae pv. morsprunorum (Psm) se establece ausente en el país; no obstante, su inserción y la participación de otras especies de Pseudomonas syringae (Ps), Pseudomonas spp y otros fitopatógenos en la patogenicidad y epidemiología de la enfermedad es una posibilidad. Debido a que Chile posee reducidos problemas patológicos en árboles de cerezo, existe la necesidad de aislar e identificar estos potenciales fitopatógenos. En el presente trabajo, se propuso el objetivo de identificar bacterias del género Pseudomonas en muestras de cáncer de cerezo, a través de una caracterización fenotípica y genotípica de las cepas aisladas. Desde muestras de árboles de cerezo con síntomas de cáncer bacteriano, se aislaron cepas similares macroscópica y microscópicamente a Pseudomonas spp, mediante siembra y observación de fluorescencia en medio King B, tinción de Gram, y pruebas bioquímicas de citrato, indol, movilidad, TSI, ureasa y por medio del sistema API 20E. Para la identificación de Pss, se realizó un bioensayo de siringomicina al sembrar las cepas seleccionadas y una especie susceptible a la toxina en medio PDA. Para la caracterización genotípica, se extrajo el DNA de las cepas seleccionadas y se realizó PCR para la detección de los genes rRNA 16S propio de Pseudomonas spp, una región conservada de especies de Ps y los genes syrB y cfl para la identificación de los patovares Pss y Psm, respectivamente. Como resultado, se aislaron 22 cepas, donde 8 de éstas se detectaron como Pseudomonas spp mediante la caracterización fenotípica, lo cual fue corroborado por medio de PCR. De éstas, 3 cepas fueron identificadas como Ps, pero ninguna cepa fue identificada como Pss o Psm, pudiendo tratarse de Ps no patógenas para cerezo. Los genes syrB y cfl fueron detectados en cepas que no fueron identificadas como Ps ni Pseudomonas spp, de lo cual se infiere una posible transferencia horizontal de los factores de virulencia hacia estas cepas. Si bien, especies de Ps pueden ser comensales, existe la posibilidad de adquisición de virulencia, o presentar patogenicidad para otras especies vegetales.es
dc.description.abstractChile is the main producer and exporter of cherries in the south hemisphere. However, the integrity of the tree and fruit quality conservation are threatened by pathogen infections. The main phytosanitary issue in cherry trees (Prunus avium) is bacterial canker due to its severity and difficult control, where Pseudomonas syringae pv. syringae (Pss) is the causal agent in Chile. A second pathovar, Pseudomonas syringae pv. morsprunorum (Psm) is stablished to be absent in our country; nonetheless, its insertion and participation of other Pseudomonas syringae (Ps), Pseudomonas spp species and other phytopathogens in the pathogenicity and epidemiology of the disease is a possibility. Because Chile has reduced pathological problems in cherry trees, there is a need to isolate and identify these potential phytopathogens. In the present work, the objective of identifying bacteria of the Pseudomonas genus in cherry bacterial canker samples was proposed, through a phenotypic and genotypic characterization of the isolated strains. From cherry tree samples with bacterial canker symptoms, strains similar macroscopic and microscopically to Pseudomonas spp were isolated by culturing and observing fluorescence in King’s B medium, Gram staining, and citrate, motility, TSI, urease and API 20E biochemical tests. To identify Pss, a syringomycin bioassay was carried out by culturing the selected strains and a susceptible species to the toxin in PDA medium. For the genotypic characterization, the DNA of the selected strains was isolated and a PCR amplification was carried out to detect the Pseudomonas spp rRNA 16S gene, a conserved region of Ps species and the syrB and cfl genes for the identification of the Pss and Psm pathovars, respectively. As result, 22 strains were isolated, where 8 of these were detected as Pseudomonas spp by phenotypic characterization, which was corroborated by PCR. Of these, 3 strains were identified as Ps, but neither was identified as Pss or Psm, which could be Ps that are nonpathogenic for cherry. The syrB and cfl genes were detected in strains that were not identified as Ps nor Pseudomonas spp, from which a possible horizontal transfer of virulence factors towards these strains is inferred. Although, Ps species could be commensals, there is possibility of virulence acquisition, or present pathogenicity towards other plant species.
dc.identifier.urihttp://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/10259
dc.language.isoeses
dc.publisherUniversidad Andrés Belloes
dc.subjectPseudomonases
dc.subjectAislamiento y Purificaciónes
dc.subjectCerezoes
dc.subjectEnfermedades y Plagases
dc.titleAislamiento de bacterias del género pseudomonas desde árboles de cerezo (Prunus Avium) afectados con cánceres
dc.typeTesises
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