Establecimiento de cultivos primarios de cáncer cervicouterino avanzado, como modelo para terapia antisentido selectiva
| dc.contributor.advisor | Villegas Olavarría, Jaime, | |
| dc.contributor.author | Ávila Campos, Rodolfo Andrés | |
| dc.contributor.editor | Facultad de Ciencias Biológicas | |
| dc.date.accessioned | 2017-08-14T13:38:18Z | |
| dc.date.available | 2017-08-14T13:38:18Z | |
| dc.date.issued | 2013 | |
| dc.description | Tesis (Magister en Biotecnología) | es_CL |
| dc.description.abstract | El cáncer cervicouterino (CaCu) es el segundo cáncer más común en mujeres. Se estima que alrededor de 530.000 mujeres son diagnosticadas cada año y alrededor del 50% mueren de esta enfermedad. Por lo tanto, es necesario desarrollar nuevas y eficientes terapias con bajos efectos secundarios. En nuestro laboratorio se ha descrito una familia de RNAs mitocondriales no codificantes. Esta familia consta de dos transcritos: sentido (SncmtRNA) y antisentido (ASncmtRNA). Estos RNA tienen una expresión diferencial en función del estado proliferativo de la célula. Tanto en células como biopsias normales proliferantes se detecta la presencia de las moléculas sentido y antisentido, células en reposo poseen una baja presencia de ambas moléculas y en células tumorales se detecta la presencia solo de la molécula Sentido por hibridación in situ. El tratamiento con oligonucleótidos en líneas celulares tumorales SiHa derivadas de cáncer cervicouterino dirigidos a la molécula antisentido gatilla la muerte masiva de estas por apoptosis. Por otro lado, este mismo tratamiento no induce eventos de muerte ni transformación en células normales queratinocitos, sugiriendo selectividad y bioseguridad . Aunque las líneas celulares de cáncer se utilizan ampliamente en la investigación del cáncer, es necesario llevar a cabo estudios en modelos celulares que se parezcan más a la fisiología de las células tumorales in vivo. Para este propósito, en este trabajo se estableció tres modelos de cultivos primarios a partir de biopsias de CaCu avanzado que han sido seleccionados por su capacidad para formar esferas en suspensión. Estos se caracterizan por el uso de anticuerpos (E-caderina, N-caderina, p161NK4a, citoqueratina 17, survivina, vimentina y a-SMA), PCR contra HPV, población SP y su capacidad para crecer independiente de anclaje. El efecto del tratamiento ASO sobre las células de cultivos primarios se evaluó mediante MTT y ensayos de TUNEL, lo que resultó en un efecto citotóxico eficiente a 300 nM de ASO para 48 y 72 horas, que también disminuye significativamente la capacidad de formar colonias en agar blando. Esto sugiere que el uso de ASOs dirigidos a los ASncmtRNAs puede ser una herramienta terapéutica eficaz y selectiva contra el cáncer. | es_CL |
| dc.description.abstract | Cervical cancer is the second most common cancer in women. lt is estimated that about 530,000 women are diagnosed each year and about 50% die of this disease. Therefore, it is necessary to develop effective therapies to decrease side effects. In our laboratory we have described a family of noncoding mitochondrial RNAs. This family consists of two transcripts: sense (SncmtRNA) and antisense (ASncmtRNA). These RNAs have a differential expression depending on the proliferative state of the cell. Normal proliferating cells in culture, as well as biopsies, show the presence of sense and antisense molecules, resting cells have a low presence of both molecules and in tumor cells only the sense is detected by in situ hybridization. Oligonucleotide treatment targeting the antisense molecules in the tumor cell line SiHa derived from cervical cancer, triggers massive death by apoptosis. On the other hand , the same treatment did not induce death or transformation events in human keratinocytes (HEKn), suggesting selectivity and biosafety. Although cancer cell lines are extensively utilized in cancer research , it is necessary to carry out studies in cellular models that resemble more closely the physiology of tumor cells in vivo. For this purpose, in this work we established three primary culture models from advanced cervical cancer biopsies, which were selected for their ability to form spheres in suspension. These were characterized by the use of antibodies (E-cadherin, N-cadherin, p161NK4a, cytokeratin 17, Survivin, vimentin and a-SMA), PCR for HPV, side population and their ability to grow independent of anchorage. The effect of ASO treatment on cell cytotoxicity of primary cultures was assessed by MTT and TUNEL assays, resulting in an efficient cytotoxic effect at 300 nM ASO for 48 and 72 hours, also significantly decreasing the ability to form colonies in soft agar. This suggest that the use of ASOs targeted to the ASncmtRNAs can be an effective and selective therapeutic tool for cancer. | |
| dc.identifier.uri | http://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/3922 | |
| dc.language.iso | es | es_CL |
| dc.publisher | Universidad Andrés Bello | es_CL |
| dc.subject | Cáncer Cérvico-Uterino | es_CL |
| dc.subject | Células Cultivadas | es_CL |
| dc.subject | Células Cancerosas | es_CL |
| dc.title | Establecimiento de cultivos primarios de cáncer cervicouterino avanzado, como modelo para terapia antisentido selectiva | es_CL |
| dc.type | Tesis | es_CL |