Caracterización electrofisiológica de la proteína OmpW de salmonella entérica serovar typhimurium en bicapas de fosfolípidos

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dc.contributor.advisorSaavedra, Claudia
dc.contributor.authorDelgado Cortés, María Graciela
dc.contributor.editorFacultad de Ciencias de la Salud
dc.contributor.editorEscuela de Bioquímica
dc.date.accessioned2019-03-29T18:17:53Z
dc.date.available2019-03-29T18:17:53Z
dc.date.issued2009
dc.descriptionTesis (Bioquímico, Magíster en Bioquímica)es_ES
dc.descriptionEste proyecto de tesis fue financiado por los proyectos FONDECYT 10500037 y proyecto UNAB DI 3906/R de la Dra. Claudia Saavedra y fue realizado con los instrumentos del Laboratorio de Fisiología Celular de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Chile.
dc.description.abstractLa membrana externa de las bacterias Gram negativo constituye una barrera de permeabilidad selectiva que permite el intercambio de iones y nutrientes, la eliminación de productos de desechos y la restricción de la entrada de compuestos nocivos a la célula. Estos procesos están mediados por proteínas formadoras de poros (porinas). El gen omp W de Salmonella Typhimurium codifica para un canal catiónico no específico, el que es inducido in vivo por metil viológeno (MV), compuesto tóxico gatillador de la generación de superoxido intracelular. También este gen es requerido para la resistencia a MV en S. Typhimurium. Esto podría representar un mecanismo de resistencia a agentes generadores de estrés oxidativo. La estructura cristalográfica de Omp W muestra un canal hidrofóbico que forma un ,8-barril de 8 hebras. En esta tesis, OmpW de S. Typhimuirum fue clonada, sobreexpresada y purificada, luego de lo cual, se realizaron experimentos de canal único bajo distintas condiciones iónicas. Este canal muestra diferentes estados de conductancia con distintas amplitudes en presencia de K+ y/o Na+. Igualmente, los estados cinéticos en presencia de K+ y Na+ difieren entre si. Se observa una variedad de modos cinéticos con diferentes fracciones de tiempo abierto y amplitudes en Na+, con alta frecuencia respecto a la situación observada en K+. Finalmente, se analizaron las propiedades biofisicas de la porina Omp W en presencia del tóxico MV y se determinó exitosamente corrientes del compuesto a través de la proteína, demostrando que la sal tóxica puede ser transportada por el poro in vitro. Por otro lado, las tasas de incorporación de Omp W en la bicapa y la conductancia del poro, dependen del tipo de fosfolípido utilizado para fonnar la bicapa. Dado que las bacterias modifican la composición de fosfolípidos de su membrana de acuerdo a las condiciones ambientales, el rol de Omp W como un agente protector contra el estrés oxidativo, podría estar mediado por cambios en micro dominios lipídicos en la membrana externa.es_ES
dc.description.abstractThe outer membrane of Gram negative bacteria constitutes a selective penneation barrier that allows the exchange of ions and nutrients, extrusion of waste products and restriction of the entry of noxious compounds to the cell. These processes are mediated by channel-forrning proteins (porins). The Salmonella Typhimurium omp W gene encocles the non-specific cationic channel OmpW, which is induced by methyl viologen in vivo, a powerful superoxide elicitor. This gene is also required for MV resistance in S. Typhimurium. This could represent a resistance mechanism to oxidative stress-triggering agents. Omp W' s crystal structure shows a hydrophobic channel that forms from eight-strand {3-barrels. In this study, s Omp W from S. Typhimurium was cloned and purify. Then, Singlechannel recordings of were carried out under severa! ionic conditions. This channel exhibits different conductance states of different amplitudes in K+ ancl/or Na+. Moreover, gating kinetics in K+ and Na+ are also different. It is observed certain kinetics modes with different open probabilities and amplitudes in Na+, with higher frequency compared with K+ situation. Finally, we analyzed OmpW biophysical properties in the presence of MV, we successfully measured MV currents trough OmpW, carried by MV, suggesting that MV can be transported by OmpW. Also, Omp W incorporation rate and conductance depends on the type of phospholipid used to form the bilayer. Since bacteria modify their membrane phospholipids composition according to sorne environmental conditions, OmpW's role as a protective agent could be modulated by changes in lipid micro domains in the membrane.
dc.identifier.urihttp://repositorio.unab.cl/xmlui/handle/ria/8353
dc.language.isoeses_ES
dc.publisherUniversidad Andrés Belloes_ES
dc.subjectSalmonella Entéricaes_ES
dc.subjectChilees_ES
dc.titleCaracterización electrofisiológica de la proteína OmpW de salmonella entérica serovar typhimurium en bicapas de fosfolípidoses_ES
dc.typeTesises_ES
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