Fac.CV - Trabajos de Titulación Post-Grado

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Examinando Fac.CV - Trabajos de Titulación Post-Grado por Autor "Alamos Musre, Alfredo Said"

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    Evaluación de la expresión de la enzima ADP-ribosiltransferasa NarE durante la invasión de epitelio de trompa de Falopio humana con Neisseria gonorrhoeae
    (Universidad Andrés Bello, 2018) Alamos Musre, Alfredo Said; Rodas Garrido, Paula; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    Neisseria gonorrhoeae (gonococo) es una bacteria Gram-negativo, patógeno exclusivo del ser humano y agente etiológico de la infección de transmisión sexual gonorrea. La incidencia de esta infección en la población ha ido en aumento desde el año 2009 y si bien la infección posee tratamiento, la multirresistencia a antimicrobianos que posee gonococo y las secuelas crónicas que puede dejar en la mujer son de gran importancia, esto debido a que si la infección asciende hasta las trompas de Falopio existe el riesgo de infertilidad. Se ha reportado que N. gonorrhoeae es capaz de invadir las células del epitelio tubárico mediante el reordenamiento del citoesqueleto, sin embargo, se desconocen las bases moleculares de esta remodelación. En nuestro laboratorio se demostró que gonococo posee el gen narE previamente identificado en Neisseria meningitidis, el cual codifica para la toxina NarE, una ADP-ribosiltransferasa. Se ha reportado que en otros patógenos bacterianos estas toxinas participan en la invasión mediante la modificación de proteínas del citoesqueleto de la célula blanco por una ADP-ribosilación. El principal objetivo de esta Tesis es evaluar la expresión del gen narE de Neisseria gonorrhoeae y detectar la presencia de la enzima durante la infección de células epiteliales de trompas de Falopio humana. Para ello se realizó una extracción de ARN bacteriano antes de infectar cultivos primarios y luego a distintos tiempos posteriores a la infección (4, 8, 12 y 24 horas) y se evaluó la expresión del gen narE mediante RT-qPCR. Posteriormente se realizó una fusión génica de narE con el epítope 3xFLAG para la detección de NarE-3xFLAG mediante Western blot en las condiciones antes descritas. Nuestros resultados mostraron que en N. gonorrhoeae hubo una expresión constitutiva del gen narE y que cuando el patógeno se encontró en contacto con células epiteliales de trompa de Falopio humana la expresión del gen narE aumentó durante las primeras horas de la infección (4 horas post-infección), mientras que la expresión disminuyó en los últimos tiempos de infección (12 y 24 horas post-infección). Además, se detectó la enzima en la fracción periplasmática de la bacteria. Posteriormente la proteína NarE fue detectada en los tiempos de 4, 8, 12 y 24 horas post infección. Adicionalmente se detectó que NarE apareció en una fracción de proteínas asociadas al citoesqueleto (E-cadherina, β-tubulina). Estos resultados sugieren que la enzima NarE de Neisseria gonorrhoeae participa en la modificación del citoesqueleto de células epiteliales de trompas de Falopio humana y que este efecto es importante en las primeras horas de infección. Por ello, es probable que NarE sea parte de los mecanismos moleculares utilizados por la bacteria durante el proceso de invasión de células epiteliales de trompas de Falopio humanas.