Fac.CV - Trabajos de Titulación Post-Grado

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Examinando Fac.CV - Trabajos de Titulación Post-Grado por Autor "Allende Connelly, Miguel"

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    Caracterización del crecimiento y renovación axonal durante la regeneración de la médula espinal en larvas de pez cebra
    (Universidad Andrés Bello, 2016) Anguita Salinas, Consuelo; Allende Connelly, Miguel; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    La regeneración neuronal es uno de los temas más relevantes en investigación biomédica ya que representa uno de los desafíos más complejos para la medicina moderna. La mayor parte de las lesiones a neuronas en humanos, tanto por patologías como por trauma, no tienen una solución terapéutica satisfactoria con lo que se hace imprescindible entender los mecanismos básicos que subyacen a los procesos regenerativos (o la ausencia de ellos) de las neuronas y sus axones para abordar este problema. En esta tesis, analizaremos el proceso regenerativo de axones de neuronas centrales usando un modelo animal que posee una robusta capacidad regenerativa, el pez cebra, con el objeto de aportar al conocimiento de los mecanismos fundamentales de la reparación neuronal. Para esto se plantearon tres objetivos: i) establecer un protocolo reproducible de daño a la médula espinal en larvas de pez cebra, ii) realizar una caracterización general del daño causado y iii) determinar si los axones que fueron interrumpidos en el daño vuelven a regenerar. Estos objetivos se abordaron mediante la utilización de líneas transgénicas que marcan distintos tipos celulares específicos para la visualización in vivo de la respuesta al daño y durante la regeneración, inmunohistoquímica para ver marcadores de proliferación y muerte celular, y finalmente trasplante de células para obtener individuos mosaicos y observar in vivo la respuesta de axones durante la regeneración. Como resultado de los experimentos realizados, se pudo establecer la metodología de daño y se demostró que los axones centrales en larvas regeneran eficientemente y reestablecen su funcionalidad. Además, describimos la secuencia de eventos celulares que transcurren durante la regeneración, señalando un rol coordinado de neuronas y glías en el proceso.
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    Regulación, estructura y función de los genes iroquois en el pez cebra
    (Universidad Andrés Bello, 2004) Feijóo García, Carmen Gloria; Allende Connelly, Miguel; Gómez-Skarmeta, Jose Luis; Facultad de Ciencias de la Vida
    Los genes iroquois (irx) codifican homeo proteínas conservadas en la evolución con funciones similares durante el desarrollo del sistema nervioso de Drosophila melanogaster y de vertebrados (revisado en 7, 22). Tanto en Drosophila como en vertebrados los genes irx se organizan en el genoma de manera similar (5, 8, 19, 23, 37, 40, 41). Así, en Drosophila, los genes irx se organizan en un complejo, el complejo irx (C-Iro), que contiene tres genes, araucan (ara) , caupolicán (caup) y mirror (mirr) (8, 19). En mamíferos, existen dos complejos iro, IrxA que contiene los genes irxl, irx2, irx4, e IrxB que contiene los genes irx3, irx5 y irx6. (5, 40). Por otro lado, tanto en Drosophila como en vertebrados, los patrones de expresión de los genes iro dentro de un complejo son muy similares (19, 28). Más aún, los ortólogos de los diferentes genes irx en distintos vertebrados presentan dominios de expresión en territorios equivalentes (2, 5, 40). Por último, los genes irx en invertebrados y en vertebrados, al menos en parte, están regulados por las mismas vías de señalización (9, 19, 20, 21, 27). Los datos antes descritos sugieren la presencia de elementos reguladores comunes a más de un gene irx dentro de cada complejo y posiblemente conservados entre las diferentes especies. La identificación de estos elementos reguladores y posteriormente los factores de trascripción que se unen a ellos permitirá dilucidar en que vías de señalización participan los genes iroquois y con ello comprender mejor su función en el desarrollo embrionario. En este trabajo hemos determinado la existencia de elementos reguladores comunes muy conservados tanto en secuencia como en función entre humano, ratón pez cebra y pez fugu. Además, este análisis nos permitió identificar el territorio en el cual cada elemento regulador dirige la expresión de irx3a, en un determinado estadio del desarrollo del pez cebra. También hemos identificado la totalidad de los miembros de la familia de genes irx de pez cebra, la cual esta compuesta por 11 genes, además de su estructura genómica. Los genes irxla e irx2a, están ubicados en el complejo IrxBa; irxl b e irx4b en el complejo Irx.Ab; irx3a, irx5a, e, irx6a se ubican en el complejo IrxBa y finalmente irx3b e irx5b están ubicados en el complejo IrxBb. irx7 no pudo ser asignado a ningún complejo. Además hemos determinado el patrón de expresión espacial para irxl b, irx2a, irx-la e irx5b, y el patrón de expresión temporal para irx3b e irx4b. Con el fin de corroborar nuestros datos observados en el pez cebra, se analizó la estructura genómica de otro pez, el pez fugu (Takifugu rubripes), siendo ambas muy similares. En el pez fugu también existen 4 complejos, Aa, Ab, Ba, Bb, con un total 10 genes, el gen irx3b se perdió en este pez. Con los datos obtenidos de la estructura genómica de ambos peces se estableció una nueva nomenclatura para los genes irx en peces. Finalmente, se determinó que irxl b se expresa en el territorio correspondiente a la placadas craniales en estadio de tailbud y que una sus funciones temprana s es participar en la definición de este territorio, lo que hace en conjunto con BMP. Por medio de dos estrategias distintas se determinó que a medida que bajan los niveles de BMP, se amplía el territorio de expresión de irxl b y con ello el territorio correspondiente a las placadas craniales. Estos resultados sugieren que se requiere un fino balance entre las concentraciones de BMP e irxl b para el correcto posicionamiento en el embrión del territorio placodal.