FM - Trabajos de Titulación Post-Grado

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Examinando FM - Trabajos de Titulación Post-Grado por Autor "Bouvet, Philippe"

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    Estudios de la expresión y la función de la variante de histona macroH2a, en la adaptación estacional de cyprinus carpio
    (Universidad Andrés Bello, 2008) Pinto Mellado, Rodrigo Omar; Vera, María Inés; Bouvet, Philippe
    Los seres vivos se encuentran constantemente sometidos a las presiones selectivas que imponen las fluctuaciones dinámicas del medio ambiente, frente a las cuales deben generar repuestas compensatorias que les permitan sobrevivir. Organismos ectotérmicos que viven en hábitats con ciclos estacionales alternados, como el pez Cyprinus carpio son un buen modelo para el estudio de las respuestas adaptativas no genéticas conocidas como plasticidad fenotípica. Fundamentalmente, estas respuestas se expresan como ajustes coordinados de tipo fisiológico y molecular. En la carpa, a nivel de la ultraestructura celular, la característica fenotípica más destacable es la transformación de la citoarquitectura del nucléolo entre un estado segregado en invierno y otro reticular en verano, alternancia de estados que trae asociada modificaciones en la estructura de la cromatina nucleolar. En este contexto, la presente tesis abordó la caracterización de algunos de los componentes estructurales de la cromatina que participan en la plasticidad fenotípica de este dominio nuclear, asociada al fenómeno de climatización estacional. Entre los componentes de la cromatina, las variantes de histonas parecen ser uno de los mecanismos epigenéticos relevantes en la configuración de sus diferentes estados. En el marco de la segregación de los componentes nucleolares en células hepáticas, planteamos como hipótesis que el reemplazo de histonas normales por la variante macroH2A forma parte de los mecanismos que permiten la adaptación invernal de la carpa. Nuestros resultados muestran que la histona variante macroH2A está sobreexpresada durante el invierno y que se localiza a lo largo del gen ribosomal. Este efecto está en consonancia con la actividad represora atribuida a esta variante y a la disminución de la tasa de transcripción del gen ribosomal observada en invierno. En conjunto con la sobreexpresión de mH2A, hemos evidenciado un aumento del nivel de metilaciones a nivel del promotor del gen y un aumento de la modificación post-traduccional trimetil lisina 4 de histona H3. Mediante ChIP-chop-qPCR demostramos que parte de las secuencias del promotor del rDNA asociadas a mH2A además están metiladas, por lo cual postulamos que existe más de un mecanismo represor de la transcripción del rDNA. En verano hay un aumento generalizado de la monometilación de lisina 36 en histona H3 y de acetilación en lisina 12 en histona H4, esta última también está aumentada en el cistrón ribosomal. Estas características ocurren en concomitancia con un mayor nivel de expresión del gen ribosomal durante esta estación. Todos estos antecedentes permiten apoyar el modelo propuesto recientemente por Huang y colaboradores (2006), que postula la existencia de tres estados en la configuración de la cromatina del rDNA: un estado heterocromático transcripcionalmente inactivo, un estado eucromático activo y un tercer estado inte1medio con características del estado eucromático pero transcripcionalmente inactivo, situación que concuerda con la estructura de la cromatina nucleolar de la carpa y sus cambios fenotípicos.