Fac.CV - Trabajos de Titulación Post-Grado

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Examinando Fac.CV - Trabajos de Titulación Post-Grado por Materia "Agentes Anti-Infecciosos"

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    Evaluación de la actividad antimicrobiana de los sobrenadantes libre de células enriquecidos en proteínas producidos por Lactobacillus Acidophilus, L. Casei, L. Fermentum y L. Rhamnosus, sobre el patógeno humano Neisseria Gonorrhoeae
    (Universidad Andrés Bello, 2018) Simonetti Covarrubias, Gigliola; Rodas Garrido, Paula; Facultad de Ciencias Biológicas; Escuela de Ingeniería en Biotecnología
    Lactobacillus spp. es un microorganismo perteneciente a la microbiota normal tanto del tracto digestivo como del tracto vaginal del ser humano. Es el microorganismo predominante presente en la microbiota normal del tracto vaginal, responsable de mantener la salud urogenital mediante la prevención del crecimiento o invasión de patógenos, a través de su adhesión al epitelio de la zona genital vaginal y además por secretar al medio extracelular compuestos antimicrobianos como ácido láctico, peróxido de hidrogeno, ácido acético y bacteriocinas. Éstas últimas proteínas de bajo peso molecular que son las de interés en este trabajo. Uno de los patógenos de interés en salud sexual es Neisseria gonorrhoeae, el cual es el agente causante de la gonorrea. Este microorganismo adquiere con facilidad resistencia a las terapias antimicrobianas, por ello que actualmente existe resistencia de las cepas a las cefalosporinas de tercera generación que corresponden al último antimicrobiano para tratar la enfermedad. Por lo tanto, es necesario buscar nuevas alternativas a las terapias de antibióticos convencionales Actualmente existe escasa evidencia en cuanto al efecto de las bacteriocinas de Lactobacillus spp. frente a Neisseria gonorrhoeae. En consecuencia, el principal objetivo de este trabajo es evaluar las propiedades bactericidas de los sobrenadantes libre de células enriquecidos en proteínas de bajo peso molecular, producidos por Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. fermentum y L. rhamnosus contra el patógeno humano Neisseria gonorrhoeae. Para ello se precipitaron los sobrenadantes libre de células (CFS) de los distintos Lactobacillus en estudio y se determinó la presencia y tamaño de las proteínas de interés mediante electroforesis, utilizando geles en gradiente de tricina 16%/6M urea. En cuanto a las proteínas observadas en la electroforesis se vieron bandas entre 6 y 14 kDa, 17 y 28 kDa y > 30 kDa, sugiriendo la presencia de bacteriocinas en los CFS utilizados en este estudio. Debido a que la producción de estos péptidos es dependiente del pH y temperatura, posteriormente se evaluó cómo estos dos factores ambientales afectaron la producción de las proteínas y el efecto antimicrobiano del CFS cuando se modificaron las dos variables antes mencionadas. Además, se evalúo la actividad bactericida de cada CFS sobre un césped del patógeno N. gonorrhoeae en placas GC para demostrar su efecto antimicrobiano. También, se evaluó el potencial efecto sinérgico entre los CFS de los distintos Lactobacillus sobre el patógeno de interés. Nuestros resultados mostraron que efectivamente hay un cambio en el efecto bactericida de los CFS cuando se modifican las variables de pH y temperatura, obteniéndose un efecto bactericida mayor en tiempos tempranos, al inicio de la fase exponencial cuando se expone a la bacteria Lactobacillus a un medio de cultivo de pH 6,5 inicial a diferencia de lo que ocurre en condiciones similares a las fisiológicas en cuanto a la temperatura 37 °C y pH 5,5 donde el mayor efecto bactericida se obtuvo en tiempos tardíos correspondientes a las 48 h (término de la fase estacionaria). Finalmente, en dos de las especies se observó que a 30°C el mayor efecto antimicrobiano se observó en fase exponencial, a diferencia de 37 °C que fue observado en fase estacionaria. En conclusión, nuestros resultados indican que las cuatro especies de Lactobacillus en estudio presentan en el sobrenadante libre de células compuestos proteicos secretados al medio extracelular con acción antimicrobiana frente al pátogeno N. gonorrhoeae. Además la modificación del pH y la temperatura genera un cambio en la actividad antimicrobiana de la fracción proteica de los CFS. Esto nos da una primera visión para seguir investigando y poder desarrollar un sistema de prevención y cuidado de la zona genital femenina, en la adquisición de infecciones bacterianas de transmisión sexual.